[发明专利]一种海棠的组织培养方法以及培养基

说明书

本发明公开了一种海棠的组织培养方法以及培养基，涉及海棠组织培养技术领域。本发明公开的海棠的组织培养方法其包括：芽诱导步骤；所述芽诱导步骤包括：将海棠外植体置于芽诱导培养基中以诱导形成不定芽；其中，所述芽诱导培养基具有如下成分：MS+0.18‑0.22mg/L TDZ+0.38‑0.42mg/L KT+0.8‑0.12mg/L NAA。该组织培养方法具有较低的污染率低以及较高的诱导率、增殖倍数和生根率，用于对海棠组织培养，可培养出大量的海棠植株，提高植株成活率，缩短育种周期。

技术领域

本发明涉及海棠组织培养技术领域，具体而言，涉及一种海棠的组织培养方法以及培养基。

背景技术

‘冬红’海棠取自江苏省江都市仙女镇(东经119°55′，北纬32°42′)的南京林业大学海棠种质资源圃。在常规的育苗方式为播种育苗，一颗种子一般只能孕育一株植株。单粒种子只可诱导单株植株，育种周期长。但现有的海棠组织培养方法对‘冬红’海棠而言存在诱导率、增殖倍数和生根率低等问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海棠的组织培养方法。该组织培养方法具有较低的污染率低以及较高的诱导率、增殖倍数和生根率，用于对海棠组织培养，可培养出大量的海棠植株，提高植株成活率，缩短育种周期。

本发明的另一目的在于提供一种用于海棠组织培养的培养基组合。该培养基组合可以用于海棠的组织培养，具有较低的污染率低以及较高的诱导率、增殖倍数和生根率，可培养出大量的海棠植株，提高植株成活率，缩短育种周期。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种海棠的组织培养方法，其包括：芽诱导步骤；上述芽诱导步骤包括：将海棠外植体置于芽诱导培养基中以诱导形成不定芽；

其中，上述芽诱导培养基具有如下成分：MS+0.18-0.22mg/L噻苯隆(N-苯基-N’-1,2,3-噻二唑-5-基脲，简称TDZ)+0.38-0.42mg/L激动素(KT)+0.8-0.12mg/L萘乙酸(NAA)；

优选的，上述海棠外植体为去除海棠种子的种皮后的胚。

种皮是在种子发育过程中进化来保护内部胚不受外界环境所损坏。而在种子萌发过程中，种皮也会限制种子的萌发，在本发明的研究中，发现种皮对种子的组织培养有较大影响，种皮会影响种子的萌发，污染率增高，不定芽的诱导率降低。因此，采用去除海棠种子的种皮后的胚作为外植体，可以大大地降低污染率、提高诱导数和诱导率。

优选的，上述芽诱导培养基具有如下成分：MS+0.2mg/L TDZ+0.4mg/L KT+0.1mg/LNAA；即在MS培养基的基础上，添加0.2mg/L TDZ、0.4mg/L KT、和0.1mg/L NAA。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，芽诱导培养的条件如下：暗培养25-35天，转光培养，光培养28-32天，光照强度1100-1300lx，时长14-16h/d。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，在上述芽诱导步骤之后，上述组织培养方法还包括：增殖培养步骤；

上述增殖培养步骤包括：将上述不定芽置于增殖培养基中以诱导形成无根苗；

上述增殖培养基具有如下成分：MS+0.48-0.52mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.18-0.22mg L NAA+0.8-0.12mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

优选的，上述增殖培养基具有如下成分：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg L NAA+0.1mg/LPVP。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，增殖培养的条件如下：光培养28-32天，光照强度1100-1300lx，时长16h/d。