[发明专利]一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法

说明书

本发明公开了一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法，所述方法为利用其HA蛋白发生G186V突变，并且不发生HA蛋白L194P突变的重组人流感H3N2病毒株接种于鸡胚，制备疫苗。本发明首次提出在H3N2流感病毒疫苗设计中提前引入G186V的突变，能够预防破坏免疫原性的L194P突变的出现，G186V的突变能够让H3N2疫苗株在鸡蛋中进行复制，但是不影响其免疫原性。本发明针对无选择性的流感疫苗制备，提供了一种预防降低免疫原性的风险，并且应用到疫苗的设计策略中后，可以更好的生产出有效性更高的H3N2流感疫苗。同时，这也提供了一种免疫策略去规避不利于免疫原性的适应性突变的产生，为后续的流感疫苗研发提供有用的思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法。

背景技术

季节性流感疫苗提供针对甲型流感病毒两种亚型H1N1和H3N2以及乙型流感病毒的保护。然而，季节性流感疫苗的有效性令人失望，尤其是对于H3N2病毒。它们的低有效性，除了可能的病毒预测错配，主要归因于基于鸡蛋的生产过程产生的适应性突变。流感病毒血凝素在受体结合位点与宿主唾液酸化多糖受体结合，从而启动病毒生命周期。病毒在鸡蛋中的生长发生在绒毛尿囊膜中，绒毛尿囊膜含有短的唾液酸化聚糖，并且主要是α2-3连接(鸟类型受体)。相比之下，人类纤毛气管上皮细胞(人类流感病毒的天然宿主细胞)中的唾液酸化多糖主要是α2-6连接(人类类型受体)。最近人类H3N2病毒的受体特异性主要针对长支链α2-6唾液酸化聚糖。因此，对于人类H3N2病毒来说，在鸡蛋中传代过程中进化透明质酸RBS(receptor binding site,受体结合位点)突变以适应绒毛尿囊膜中的鸟类型受体存在很大的选择压力。因为透明质酸RBS与几个主要抗原位点部分重叠，鸡蛋适应性突变可以显著改变甲型流感疫苗的抗原性，降低季节性流感疫苗的效力。虽然这些问题可以通过基于细胞或重组流感疫苗来解决，但由于生产成本低以及现有的年度生产基础设施，市场上现有的大多数流感疫苗仍然是基于鸡蛋的。

虽然鸡蛋适应性突变对于鸡蛋型季节性流感疫苗的高产至关重要，但理想的鸡蛋型疫苗应该只携带那些对抗原性影响最小的鸡蛋适应性突变。在可预见的未来，基于鸡蛋的疫苗很可能仍然是针对季节性流感病毒的主要全球预防措施，因此在鸡蛋适应过程中表征流感病毒的进化非常重要。

H3N2季节性流感疫苗在生产的过程中主要在鸡蛋中进行传代扩大，并应用到人群的流感免疫中。但是由于禽类和人类的唾液酸受体的不一样，导致了流感病毒适应性突变的出现，而且部分突变。H3N2流感疫苗在鸡蛋中接种的过程中，L194P是常见的适应性突变，尽管L194P突变可以让H3N2病毒在鸡蛋中很好的适应性复制，但这个突变会引起疫苗免疫原性的降低，产生的抗体不能够结合和中和鸡蛋接种前的原始病毒株，从而降低H3N2疫苗的有效性。

如何解决鸡蛋适应性突变引起的疫苗有效性降低成为科学研究的热门。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种防止接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法

本发明的第一个目的是提供一种重组人流感H3N2病毒株。

本发明的第二个目的是提供所述重组人流感病H3N2毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。

本发明的第三个目的是提供人流感H3N2病毒HA蛋白的G186V突变在抑制HA蛋白的L194P突变中的应用，

本发明的第四个目的是提供一种人流感H3N2病毒疫苗的制备方法

本发明的第五个目的是提供HA蛋白发生G186V突变的重组人流感H3N2病毒株在制备流感病毒疫苗中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种接种于鸡蛋的季节性人流感H3N2病毒抗原性降低的方法。