[发明专利]一种提取微生物DNA的试剂盒及其方法在审
| 申请号： | 201910396839.4 | 申请日： | 2019-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN110029105A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 孙梓健;曾俊儒;汪凯;丁泽琴;陈云慧;曾陈娟 | 申请（专利权）人： | 成都罗宁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 石燕妮 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 微生物DNA 裂解液 平衡液 磺酸苯基 异噻唑啉 丙基三甲氧基硅烷 三羟甲基氨基甲烷 分子生物学技术 聚乙烯吡咯烷酮 二甲苯青 方法提取 高效抑制 室温条件 吡唑啉酮 感染性 基氨基 乙磺酸 溴酚红 吗啉 偶氮 通量 羧酸 微生物 样本 生长 运输 | ||
1.一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括裂解液和平衡液，所述裂解液包括5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、RNaseA、聚乙烯吡咯烷酮、2-(N-吗啉代)乙磺酸、溴酚红、二甲苯青FF，所述平衡液包括3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠、三羟甲基氨基甲烷。
2.根据权利要求1所述的一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括0.001％～12％的5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001％～10％的2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.01mM RNaseA、0.5％的聚乙烯吡咯烷酮、100～200mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸、0.1～0.5％的溴酚红、0.01～0.5％的二甲苯青FF。
3.根据权利要求2所述的一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括0.002％的5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001％的2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.01mMRNaseA、0.5％聚乙烯吡咯烷酮、150mM的2-(N-吗啉代)乙磺酸、0.5％的溴酚红、0.25％的二甲苯青FF。
4.根据权利要求2所述的一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述平衡液包括0.01～15％的3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，0.25％的1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠、50～200mM的三羟甲基氨基甲烷。
5.根据权利要求4所述的一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述平衡液包括0.1％的3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，0.25％的1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠、100mM的三羟甲基氨基甲烷。
6.根据权利要求1～5任意一项权力要求所述的一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解液的pH为5.8～6.4，所述平衡液的pH为8.6～10。
7.一种提取微生物DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将0.05g～0.1g生物样本与0.1ml裂解液充分混匀，高速涡旋振荡后室温静置1分钟，得到混合溶液；
S2：向所述混合溶液中加入0.2ml平衡液，充分混匀后室温静置10分钟，得到粗提液。
8.根据权利要求7所述的一种提取微生物DNA的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述粗提液于15000xg离心力条件下离心1分钟，取上清液。
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