[发明专利]一种唾液保存液及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种唾液保存液及其制备方法和应用，所述唾液保存液包括如下组分：EDTA 1‑10mmol/L、乙二醇‑双‑(2‑氨基乙醚)四乙酸1‑10mmol/L、苄基青霉素钠盐30‑70μg/mL、硫酸链霉素30‑70μg/mL、Tris‑HCl 30‑70mmol/L、4‑(2‑羟乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸1‑25mmol/L、N‑三(羟甲基)甲基甘氨酸30‑70mmol/L、蛋白酶K 5‑30μg/mL、蔗糖1‑50mmol/L，溶剂为无菌水。本发明所述唾液保存液通过各组分在特定浓度范围内合理搭配，使长时间常温保存于其中的DNA样本能够保持其完整性，无需DNA提取可直接用于PCR扩增；可用于NGS实验，能适应复杂的多重PCR实验，并能满足长片段扩增的需求。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种唾液保存液及其制备方法和应用。

背景技术

随着生物技术的发展，DNA样本在分子生物学、医学鉴定、检测与治疗等领域中应用越发广泛。通常用于PCR扩增或检测的DNA是从抗凝血液中提取的，但血液样本作为DNA来源在一定程度上受到了限制，主要体现在两方面，一方面血液保存长时间容易形成凝集，对提取造成不便；另一方面采集血液也会对人体造成一定的创伤并且还要依靠专业技能才能完成。

唾液DNA样本采集相对于传统的抽取血液采集DNA的方式来说，是一种对人体无伤害、无痛苦的获取DNA的方法，不易引起被采集者的不适和畏惧心理，该法不会对被收集者造成任何不适，容易被接受，因而能最大限度地扩大基因研究的取样范围，特别适合分子流行病学大规模人群调查。

随着二代测序技术在临床检测方面的普及，简便快捷地获取人体DNA，且能长期稳定地保存越发重要。唾液样本是很理想的DNA获取方式，但是不适当的保存液会导致DNA降解或含有某些影响下游基因检测的成分。目前用来保存唾液的保存液，有些含有氯化镁，易导致DNA降解，长期保存后，对下游长片段扩增有影响。有些含有蔗糖，但缺乏抑菌物质，虽然可以很好的维持细胞渗透压，但是容易引起细菌等微生物的滋生，不利于唾液的长期保存。

CN105368812A公开了一种唾液保存液及其制备方法和用途，所述唾液保存液包括如下组分和含量：氯化锂0.1-2mol/L，Tris-HCl 1-50mmol/L，尿素0.1-2mol/L，SDS0.1-2％(w/v)，EDTA1-10mmol/L，乙醇10-90％(v/v)，体系pH范围在7-10之间，尿素、乙醇等成分虽然可以将唾液中的黏蛋白和球蛋白等有机物进行变形处理，但同时也会对细胞造成裂解，不利于DNA的完整性保存。

CN105039306A公开了一种唾液保护剂及其制备与应用，每1000mL所述唾液保护剂中含有：三羟甲基氨基甲烷10-50mmol；乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠0.5-20mmol；硫酸铵200-1000mmol；葡萄糖1-50mmol，将唾液保存到本发明的唾液保护剂中，前60天几乎没有变化，DNA仍然完整，没有明显的降解；6个月后仍然如此，12个月后，DNA完整性依然如故。其成分中含有葡萄糖，虽然可以很好地保持唾液保存液的粘度并维持细胞渗透压，但容易引起细菌等微生物的滋生。

CN102440234A公开了一种人体唾液保存固定液及其制备与应用，包括如下组分：蔗糖、Tris-HCl、MgCl₂、异硫氰酸胍及水。本发明的唾液固定液具有很好的保存作用，其保存效果明显优于使用单一组分保存唾液，且成本较低，配制方便，但其中含有蛋白质变性剂异硫氰酸胍，其可以抑制核酸酶的活性但同时也会裂解细胞，使得DNA处于游离状态，不利于DNA的完整性保存。

因此，开发出一种能够使DNA长期完整保存，能抑制细菌滋生，且能适应复杂的多重PCR实验，满足长片段扩增需求的唾液保存液是非常有必要的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种唾液保存液及其制备方法和应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：