[发明专利]测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法

权利要求书

1.一种测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法，所述核苷酸代谢物包括腺苷、2'-脱氧腺苷、鸟苷、2'-脱氧鸟苷、肌苷和2'-脱氧肌苷，其特征在于，包括：

1)将待测滤纸干血片在提取工作液中进行萃取处理，以便获得含有所述核苷酸代谢物的萃取液；

2)将所述萃取液进行液相色谱分离-质谱检测；

3)基于液相色谱分离-质谱检测结果，确定所述滤纸干血片中核苷酸代谢物的产量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸代谢物来源于血液样本。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取工作液包括所述核苷酸代谢物同位素内标准品和浓度不低于50％的甲醇，优选70％～100％甲醇，优选75％～100％甲醇，更优选75％的甲醇或100％的甲醇；

任选地，所述核苷酸代谢物同位素内标准品包括核糖2-13C-腺苷、15N4-肌苷和15N5-鸟苷；

任选地，所述核糖2-13C-腺苷、所述15N4-肌苷和所述15N5-鸟苷在所述提取工作液中的浓度为10ppb。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述萃取处理是在如下条件下进行的：

将所述待测滤纸干血片置于100μL的所述提取工作液中，并在25℃、750rpm、避光的条件下进行孵育30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，萃取处理后、液相色谱分离-质谱检测前，进一步将所述萃取液进行氮吹干、复溶处理和离心处理，以便获得待上样液；

任选地，所述复溶处理是在纯水中进行的。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱分离是在如下条件下进行的：

进样体积为5uL，色谱柱为HSST3(50*2.1mm，1.7um)或HILIC，柱温为45℃，流动相A为含有0.1％甲酸的水溶液，流动相B为含有0.1％甲酸的乙腈溶液，每个样品检测时间2.0min，洗脱梯度为：

时间点min	流速ml/min	％A
0	0.5	99
0.75	0.5	99
1.0	0.5	5
1.5	0.5	5
2.0	0.5	99

。