[发明专利]黄金百香果叶片诱导分化成苗方法

说明书

本发明公开了黄金百香果叶片诱导分化成苗方法，属于植物组织培养技术领域。本发明以成熟植株黄金百香果叶片为外植体，建立无菌体系、经过诱导培养和继代培养，获得具有完整根系和茎、叶的种苗。叶片外植体经诱导分化成小苗，在继代培养阶段形成的粗状种苗，根、茎、叶分化较完整，种苗种植后成活率高，生长快。该方法实现了无菌条件下的百香果的种苗快繁，从而解决目前百香果种苗质量参差不齐、苗木带病、品种不纯正的问题，为发展百香果产业奠定基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及黄金百香果叶片诱导分化成苗方法。

背景技术

百香果属于西番莲科Passion fruit，又称西番莲、巴西果、鸡蛋果。百香果富含人体所需的氨基酸、多种维生素、类胡萝卜素、超氧化物岐化酶（SOD）、硒以及各种微量元素。百香果被称为水果中的VC之王。常食用百香果具有提神醒脑、养颜美容、生津止渴、帮助消化、化痰止咳、缓解便秘、活血强身、提高人体免疫功效。目前百香果种苗存在质量参差不齐、苗木带病、品种不纯正等问题，制约了百香果产业进一步发展壮大。为确保品种纯正、质量优良的种苗供应，建立标准化的百香果种苗繁育中心作为百香果产业发展的重点工作。百香果其根状茎发达，节上生根，根茎多具浓密根毛。木质茎含有较丰富的内生菌，对杀菌剂反应敏感，容易变色，无菌体系建立难，组织培养没有较权威的成熟技术可参考，现未查到有关叶片分化成苗的黄金百香果组织培养的报道。本发明以成熟植株黄金百香果叶片为外植体分化成无病苗木，建立百香果苗木的快繁体系，从而更好地发展壮大百香果产业。目前，国内围绕百香果开展的科学研究主要涉及栽培技术、食品加工、化学成分、生理活性等方面，对黄金百香果叶片分化成苗方法的分析研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种黄金百香果叶片诱导分化成苗方法。该方法以成熟黄金百香果叶片为外植体，在无菌条件下，经诱导分化和继代培养获得无病的黄金百香果优质种苗，建立百香果的种苗快繁体系，为百香果产业的发展奠定基础。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

黄金百香果叶片诱导分化成苗方法，包括以下步骤：无菌体系建立、诱导培养和继代培养。

黄金百香果叶片诱导分化成苗方法，包括以下具体步骤：

（1）无菌体系建立；选择生长旺盛无病植株新叶为外植体，经表面清洗后，放在 1wt%次氯酸钠溶液浸泡 15 分钟，用自来水冲洗干净，放入75vol％ 酒精中灭菌 30 秒，再以0.1wt％ 升汞灭菌 7 ~ 10 分钟，用无菌水冲洗 4 ~ 5 次。

（2）诱导培养；在无菌条件下将叶片接种到诱导培养基上，在每天连续光照 8 h ，光照强度1500 ~2 000 lx，培养温度25±1 ℃，100-110天。

（3）继代培养；诱导培养基上形成的小苗在无菌条件下移接到生长培养基上，在每天连续光照 12 h ，光照强度2 000 ~ 2500 lx，培养温度25±1 ℃，80-90天，形成具有比较完整根系和茎、叶。

上述步骤（2）中所述诱导培养基为：MS基本培养基中附加6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5mg/L、IBA 0.2 mg/L和KT 0.1 mg/L，白糖20 g/L。

上述步骤（3）中所述生长培养基为：1/2 MS 基本培养基中附加NAA 0.5 mg/L、IBA0.1 mg/L、纳米氧化硅1 g/L，白糖15 g/L、土豆30 g/L、蛋白胨1.5 g/L。

本发明的优点在于：