[发明专利]抗BCMA的人源化单链抗体及应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种抗BCMA的人源化单链抗体及其应用，所述抗BCMA的人源化单链抗体氨基酸序列如SEQ ID NO:17‑20或34‑41任一序列所示。所述抗BCMA的人源化单链抗体由轻链可变区、Linker和重链可变区依次连接形成，人源化程度高，可以有效地降低CAR的免疫原性，增强CAR‑T在体内的持续和安全性。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种抗BCMA的人源化单链抗体及其应用。

背景技术

BCMA全称为tumor necrosis factor receptor superfamily member 17，又称为B-cell maturation antigen(BCMA)或CD269或TNFRSF13A，主要表达于成熟B淋巴细胞和浆细胞表面，在MM组织和细胞中高表达，是治疗恶性血液病多的合适的靶点，而发性骨髓瘤(MM)属于恶性血液病中的一种。

多发性骨髓瘤又称multiple myeloma，简写为MM，据统计MM的高发年龄段在65-74岁，并发症包括高钙血症，肾脏机能不全、贫血和感染。虽然初次治疗MM对多种细胞毒性药物均较为敏感，但是由于高度异质性和耐药性MM复发概率高，目前不能治愈。

抗体是免疫系统中最重要的分子之一，也是目前免疫疗法中主要治疗手段之一，但是直接使用小鼠抗体进行人体治疗时，因为鼠抗的异质性会引起人抗鼠抗体反应(Humananti-mouse antibody reaction，HAMA)，导致抗体半衰期短，在循环系统中被很快清除，失去疗效。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应，因此，抗体的人源化修饰以提高抗体的人源化程度、减弱HAMA就显得至关重要。

此外，抗体的稳定性和可靠性仍然长久以来困扰着抗体产业，也是整个生物学研究领域需要突破的大的瓶颈。而我们针对鼠源抗体的人源化以及稳定性、特异性和亲和性改造是很有必要的。

单链抗体作为抗体的一种，除了可以发挥抗体的作用，还可以应用于病原靶点检测，也是最新的细胞治疗如CAR-T的CAR结构中重要的组成部分，其选择对CAR-T疗效起到至关重要的作用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种靶向BCMA的人源化单链抗体，所述抗BCMA的人源化单链抗体可以有效地降低BCMA-CAR的免疫原性，增强CAR-T在体内的持续和安全性。。

并非所有改造的抗BCMA ScFv均能够具有活性，并且形状稳定；也并非所有改造的抗BCMA ScFv的免疫原性能够降低；并非所有改造的抗BCMA ScFv能够作为CAR结构中抗原识别区应用。由于不同鼠源骨架区对抗体功能的影响不同，简单的进行人源框架的替换可能会导致改造的ScFv丧失活性或者获得的人源化ScFv虽然亲和力；另一方面，人源化改造势必降低ScFv的亲和力，不同的亲和力对CAR-T功能影响也有不同。因此需要进行大量的筛选和研究寻找更稳定有效的识别BCMA的ScFv。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

所述的抗BCMA的人源化单链抗体通过以下步骤改造得到：

1)通过分子对接模拟，对鼠源抗体骨架区序列进行人源化修饰改造，以此获得具有共同活性区域的人源化的单链抗体；

2)将步骤1)获得的人源化的单链抗体进行回复突变和免疫原性的优化，以此获得活性好、低免疫原性的人源化的单链抗体。

所述抗BCMA的人源化单链抗体，轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。