[发明专利]一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用

说明书

本发明公开了一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用，可以实现对伪结核棒状杆菌的人工致弱，通过本方法对伪结核棒状杆菌实现长期传代致弱，可将其作为疫苗株应用于畜禽免疫产业，日后其推广和应用具有巨大的市场需求，能够产生可观的经济和社会效益。

技术领域

本发明涉及微生物及生物技术领域，更具体的说是涉及一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用。

背景技术

伪结核棒状杆菌(Corynebacterium Pseudotuberculosis)是引起动物干酪性淋巴结炎(Caseous Lymphadenitis，CLA)的重要病原，以感染羊和骆驼等动物多见，同时可感染人。在全球范围内多数国家均有关于伪结核棒状杆菌感染羊群引发羊干酪性淋巴结炎的报道。近年来，我国关于羊伪结核棒状杆菌感染所致的羊干酪性淋巴结炎报道也逐渐增多，而且国内山羊发病感染情况较绵羊更为严重。

伪结核棒状杆菌一旦感染羊群，则环境中难以清除。由于抗生素难以穿透病变部位包囊直达病灶，导致治疗效果较差；另一方面，待脓变组织成熟后，多用外科排脓手段进行治疗，操作不当则易于造成环境污染。在多种因素综合作用下，导致该病的治疗效果欠佳，因此，开展针对伪结核棒状杆菌的疫苗研究对于该病的预防有重大意义。

关于伪结核棒状杆菌疫苗的研究，主要以基因敲除疫苗、灭活疫苗和类毒素制剂为主，但多停留在科研阶段，目前实际生产中尚无市场普及且保护率极其可靠的疫苗。伪结核棒状杆菌为兼性胞内寄生菌，在机体免疫系统中，体液免疫和细胞免疫均发挥重要作用，在该菌的疫苗制剂中弱毒活疫苗具有较大潜力。

因此，提供一种伪结核棒状杆菌致弱方法及在疫苗中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用，通过人工传代致弱方法使伪结核棒状杆菌毒力减弱，最终将致弱株应用于疫苗领域，旨在研发出有良好保护力的疫苗株，为当前伪结核棒状杆菌引起的羊干酪性淋巴结炎起到预防作用，进而减小经济损失。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种伪结核棒状杆菌致弱方法，将伪结核棒状杆菌菌株进行连续传代培养，获得人工致弱菌株。

进一步，所述连续传代培养的培养温度为37℃。

进一步，所述连续传代培养的培养基为10％绵羊血琼脂平板。

进一步，所述连续传代培养为传至200代。

进一步，所述的人工致弱菌株作为疫苗株的应用。

进一步，所述的人工致弱菌株在制备疫苗中的应用。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种伪结核棒状杆菌致弱方法及应用，根据在不同温度条件下连续培养传代实现伪结核棒状杆菌菌株的人工致弱，通过不同温度条件连续传代培养致弱伪结核棒状杆菌的方法目前还未有报道；经过动物实验证实，传代株与原代菌株相比，其引起的病理变化程度和死亡率均明显下降，证实传代菌株的致病力在逐步减弱。本发明方法可以实现对伪结核棒状杆菌的人工致弱，通过本方法对伪结核棒状杆菌实现长期传代致弱，便有可能将其作为疫苗株应用于畜禽免疫产业，日后其推广和应用具有巨大的市场需求，能够产生可观的经济和社会效益。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明LX1菌株37℃培养条件下不同代次菌株小鼠病变面积；阴性对照为注射生理盐水；

图2附图为本发明LX1-37-200代小鼠致病性试验结果；