[发明专利]球毛壳菌素A作为酪氨酸酶抑制剂上的应用

说明书

本发明公开了球毛壳菌（Chaetomium）QY‑1对酪氨酸酶的抑制作用研究。该球毛壳菌QY‑1菌株，分离自三峡河岸带疏花水柏枝。本发明以球毛壳菌QY‑1为原料，通过发酵培养，真空抽滤，乙酸乙酯萃取，经硅胶柱层析丙酮—石油醚梯度洗脱，液相分析及制备，结晶、重结晶得到次级代谢产物球毛壳菌素A。通过测定球毛壳菌QY‑1的粗提物和其次级代谢产物球毛壳菌素A对酪氨酸酶的抑制效果，发现QY‑1的粗提物及球毛壳菌素A对酪氨酸酶均具有很好的抑制效果，同时通过计算机辅助药物设计分析，发现球毛壳菌素A对酪氨酸酶具有一定的结合能力。因此可用于制备酪氨酸酶抑制剂，也可以应用于化妆品，医药等领域，具有很高的研究价值以及良好的经济和社会效益。

技术领域

本发明涉及球毛壳菌A对酪氨酸酶的抑制作用研究，主要应用于酪氨酸酶抑制剂的研究以及开发利用。

背景技术

酪氨酸酶(tyrosinase，Tyr，EC.1.14.18.1)又称酚氧化酶、多酚氧化酶(PPO)、儿茶酚氧化酶，是一种含铜的金属氧化还原酶，活性中心是由两个含铜离子位点构成，广泛存在于动植物、微生物及人体中。在生物体内，酪氨酸酶对酪氨酸和其它酚类化合物的代谢及黑色素的合成起重要的催化作用，其活性与黑色素的合成量成正相关，同时也是果蔬褐变的关键酶，研究表明酶的活性越高，果蔬褐变(氧化)的速度越快，保藏期越短。

为了抑制黑色素的形成以及果蔬褐变，对于酪氨酸酶抑制剂(tyrosinaseinhibitor，TI)的研究有很多，因TI在美容保健、色素型皮肤病的治疗、病虫害防治以及食品保鲜等方面有着广泛的应用。有研究表明TI可直接抑制酪氨酸酶活性以及调控细胞中酪氨酸酶的表达量可有效调控黑色素的生成，从而达到美白及治疗色素紊乱症的作用；同时还可以抑制果蔬褐变，延长货架期。

本发明以内生真菌QY-1为原材料，从其次级代谢产物中分离得到一纯物质球毛壳菌素A，已知其具有广谱拮抗性和抗逆性，对多种杭物病害具有良好的防治效果，对肿瘤细胞强烈的细胞毒性、抗细菌和真菌活性(稻瘟病，立枯丝核菌和腐霉菌等植物病原菌)。

发明内容

本发明提供一种球毛壳菌素A对酪氨酸酶的抑制活性，可用于制备、研发酪氨酸酶抑制剂，为开发新型高效的酪氨酸酶抑制剂提供选择，其不仅对提高蔬菜、水果等食品的质量和营养价值有重要意义，而且防治人类的许多色素沉着疾病以及其它与黑色素有关的健康问题等方面有着重要的应用价值。

一株球毛壳菌(Chaetomium globosum)QY-1菌株，该菌株具有对酪氨酸酶的抑制作用，可用于制备酪氨酸酶抑制剂，为开发新型的酪氨酸酶抑制剂提供了新选择。

所述球毛壳菌(Chaetomium globosum)QY-1菌株是从疏花水柏枝(MyricariaLaxiflora)的叶中获得的内生真菌，于2016年4月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为，CCTCC NO：M 2016178。保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

本发明球毛壳菌(Chaetomium globosum)QY-1在马铃薯葡萄糖培养基上具有以下微生物学特性：菌落生长缓慢，初期菌落为白色，渐变成暗青色，里层颜色较深，呈黄褐色，背面为米黄色，菌丝分支有隔。

本发明另一目的是提供一种活性成分为球毛壳菌QY-1的次级代谢产物用于酪氨酸酶抑制剂，具体为球毛壳菌素A。对酪氨酸酶的酶活测定实验表明，当对酪氨酸酶活力的抑制率达到50％左右时，球毛壳菌粗提物的浓度为1mg/mL，即球毛壳菌素A的浓度为1mg/mL，正对照Vc的浓度为0.2mg/mL，正对照熊果苷的浓度为5mg/mL。因而，本发明还包括含有所述菌株或者其发酵液的生物制剂，以及含有所述菌株的微生物菌剂。同时使用薛定谔软件进行分子对接分析，发现球毛壳菌素A对酪氨酸酶(PDB编号：5CE9)具有强烈的结合能力，说明球毛壳菌素A是通过与酪氨酸酶结合从而抑制黑色素的产生。

附图/表说明