[发明专利]一种伪狂犬病抗体阻断检测试纸

说明书

本发明公开了一种伪狂犬病抗体阻断检测试纸，由支撑板、抗原垫、金标垫、检测膜和吸水垫构成，抗原垫吸附伪狂犬病病毒检测抗原，金标垫吸附胶体金标记的抗伪狂犬病病毒gE和gB单克隆抗体mAb1和mAb2，检测膜上含有强毒检测线T1“|”、疫苗毒检测线T2“|”和质控线C“|”印迹，强毒检测线T1为抗伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体mAb3印迹，疫苗毒检测线T2为抗伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体mAb4印迹，质控线C为兔抗小鼠IgG抗体pAb1或金黄色葡萄球菌SPA印迹“|”。该试纸实现了伪狂犬病病毒感染和免疫抗体的快速检测和实时监测，感染与免疫鉴别检测以及疫苗免疫效果的免疫评价，并且操作简单，易于大范围推广应用。

技术领域

本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫抗体检测器具，特别是涉及一种伪狂犬病抗体阻断检测试纸。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的多种动物共患传染病，可感染牛、猪、犬、羊、狐狸和猫等。猪是伪狂犬病的传染源和自然贮存宿主，猪感染PRV后表现为发热，仔猪神经症状、高死亡率，大中猪呼吸道症状，母猪流产等临床特点。在2010年，伪狂犬病是我国规模化猪场进行疫病控制最为理想的疾病之一，许多猪场已经达到免疫无感染状态。然而在2011年，一些Bartha-K61疫苗免疫的猪场出现了变异的伪狂犬病病毒，表明传统的gE基因缺失疫苗已经不能提供足够的免疫保护。河南省猪群伪狂犬病的感染率自2005年以来呈现整体下降趋势，临床上以散发或非典型病例为主。但是，从2011年底开始，我省部分猪场突发伪狂犬疫情，很快在省内各地爆发，广泛流行；而且，部分猪场附近的羊、犬、猫、狐狸等动物也出现感染死亡状况。因此，现阶段我国伪狂犬病的防控变得更为棘手和复杂。

PRV属于疱疹病毒科(Herpesviridae)，α-疱疹病毒亚科(Alpha Herpesvirinae)的成员，基因组为线性双链DNA，大小约150kb。整个PRV基因组至少含有70个基因，编码70-100余种蛋白。目前研究发现PRV可编码11个糖蛋白：gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN。gB、gH、gL和gM蛋白在疱疹病毒科中比较保守，而且gB、gH和gL对所有疱疹病毒在细胞培养物中的复制都是必需的。gB蛋白能够诱导中和抗体的产生，与免疫保护相关。gE蛋白最早被称为gI蛋白。1960年筛选制备的PRV疫苗株如Bartha株及BUK株等均存在gE基因缺失。20世纪80年代中期，通过DNA重组技术构建了gE基因缺失的PRV突变株；在此基础上，将TK基因进行缺失使PRV病毒得到进一步弱化。许多gE基因缺失疫苗均能够预防攻毒感染或减轻攻毒感染所造成的临床症状。虽然当前也存在gC基因和gG基因缺失的PRV疫苗，但在许多国家仅允许猪群使用gE基因缺失疫苗。

从1990年到2011年底，我国80％以上猪群均使用了gE基因缺失疫苗Bartha-K61进行免疫接种。gE疫苗和gE抗体诊断配套使用用于PRV净化的前提是所有流行毒株均表达gE蛋白，而且流行株感染的动物均产生gE蛋白的抗体。目前几乎所有PRV野毒株均表达gE蛋白。通过gE基因缺失疫苗与gE抗体诊断方法的联合使用，一些欧洲国家如德国、奥地利、瑞典、丹麦和英国及美国已成功在家养猪群中净化了伪狂犬病。我国政府在2011年制订了《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》，提出到2015年，原种猪场伪狂犬病达到净化标准；到2020年，全国所有种猪场伪狂犬病达到净化标准的目标。然而病原体的净化是一项长期而且艰巨的任务。如果要实现完全净化或接近净化状态可能需要100年时间甚至更长；例如美国的伪狂犬病首次出现在1909年，其净化计划始自1989年，到2005年绝大多数净化项目得以完成。即便如此，野猪群中PRV病毒的存在也对家猪再次感染PRV造成了很大的威胁。因此，建立简便、快速、特异、敏感的鉴别诊断方法区分疫苗免疫动物及病毒感染动物十分必要。