[发明专利]基因甲基化分析方法、产品和用途

权利要求书

1.一种DNA甲基化分析方法，包括1)使含有DNA的生物样品与有核酸吸附能力的载体、裂解液同时接触，将DNA富集于载体上；2)直接使步骤1)获得的吸附有DNA的载体与转化试剂接触从而将载体上富集的DNA的至少一个未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或在杂交上可检测的不同于胞嘧啶的其它碱基，3)再用结合液处理步骤2)得到的混合液，使转化后的DNA再富集于载体上。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤1)还包括添加核酸结合促进剂，所述核酸结合促进剂包括促进裂解液中的核酸与有核酸吸附能力的载体结合的有机溶剂和/或润湿剂中的至少一种，例如异丙醇、异丁醇、正丁醇、丙酮、吡啶、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、丙二醇、甘油、二甲亚砜、聚乙二醇、烷基硫酸盐、磺酸盐或酯、多元醇表面活性剂(例如司盘类、吐温类表面活性剂)、聚氧乙烯表面活性剂。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述裂解液包含胍盐，如盐酸胍、异硫氰酸胍，任选地还包含去垢剂如SDS，金属离子螯合剂如EDTA，金属盐如NaCl，任选地所述裂解液配制成缓冲溶液，如三羟甲基氨基甲烷缓冲液、柠檬酸缓冲液，任选地步骤1)进一步包括使所述含有DNA的生物样品与蛋白酶如蛋白酶K接触。

4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述转化试剂包括亚硫酸氢盐、焦亚硫酸盐或其组合，例如亚硫酸氢钠、亚硫酸氢镁、亚硫酸氢铵、焦亚硫酸钾、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠中的一种或多种，例如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠的混合溶液。

5.权利要求1-4任一项所述的方法，其中步骤2)的转化过程中还添加有DNA保护作用的自由基阱，包括但不限于：氢醌、6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸、6-羟基-2，5，7，8-四甲基色满-2-甲酸中的一种或多种的有机溶液，如二乙二醇二甲醚溶液、氯仿溶液或四氢呋喃溶液。

6.权利要求1-5任一项所述的方法，其中有核酸吸附能力的载体包括但不限于：磁珠、非磁性的微球、吸附膜。

7.权利要求6所述的方法，其中所述载体包括但不限于：羟基磁珠、羧基磁珠、链霉亲和素免疫磁珠、离子交换树脂，磁珠的壳层优选氧化硅或琼脂糖，磁珠优选超顺磁珠，磁珠粒径为100nm～3μm，优选500-1μm。

8.权利要求1-7任一项所述的方法，还包括转化后处理步骤，从而制备适于直接进行后续甲基化检测的样品，所述转化后处理步骤包括使用清洗液对转化后的富集于磁珠上的核酸进行清洗的步骤，任选地所述清洗液包括三羟甲基氨基甲烷溶液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液、乙醇溶液，任选地所述清洗液的pH在6～10范围内，优选pH为8～10，优选地所述转化后处理不包括脱磺处理。

9.权利要求1-8任一项所述的方法，其中所述生物样品选自任何含有DNA的样品，包括但不限于：无细胞来源的样品或细胞来源的样品；任选的包括但不限于：血液、尿液、粪便、细胞培养液、组织、痰液、胸水、腹水、脑脊液以及这些样品的处理品，任选地所述生物样品可以来自健康受试者和/或患者，例如癌症患者。

10.权利要求1-9任一项所述的方法，其中所述结合液包括离液序列高的盐，如胍盐，例如盐酸胍、异硫氰酸胍，任选地所述结合液可以加入缓冲溶液。

11.适合于权利要求1-10任一种方法的用于DNA甲基化分析的试剂盒，其使用说明中包含权利要求1-10任一项所述的方法，其包含一个或多个容器，所述容器中包含权利要求1-10中任一项中限定的试剂。

12.权利要求11所述的试剂盒，所述试剂盒中进一步包括对转化处理后的DNA进行检测的试剂，例如PCR试剂，探针，测序试剂。