[发明专利]一种规模化鸡场环境中滑液囊支原体的检测方法

说明书

本申请公开一种规模化鸡场环境中滑液囊支原体的检测方法。采样人员需带一次性塑料手套和口罩，用消毒后镊子将无菌棉纱布浸入装有5mL生理盐水的10mL离心管内润湿；在采样位置确定50cm长采样区域，用润湿棉纱布往返擦拭5次，塞入离心管内并封口；提取离心管内液体核酸进行滑液囊支原体病原检测。本方法通过采集环境中各类物体表面棉布试子，检测其有无滑液囊支原体特定核酸片段及检出率，分析环境中是否存在滑液囊支原体病原及环境感染压力。采样方法具有简单易行、样本量大、方案可复制等特点，且检测结果可代表环境中滑液囊支原体病原载量高低。基于相同采样方法、评价标准，可实现不同场、不同区内病原含量对比，为滑液囊支原体防控提供检测依据。

技术领域

本申请涉及滑液囊支原体检测技术领域，特别涉及一种规模化鸡场环境中滑液囊支原体的检测方法。

背景技术

滑液囊支原体主要引起鸡和火鸡的感染，是家禽重要传染病，近年来呈严重感染趋势，造成养殖场较大经济损失。滑液囊支原体主要引起生长期雏鸡的呼吸道感染、跛行、生长迟缓等。滑液囊支原体可经垂直传播、水平传播造成鸡群感染，所以监测种源、环境中滑液囊支原体病原携带率具有重要意义。

现有方法只提供了诊断性样品(组织样品、溶液)的核酸检测方法。养殖企业引种过程中对环境内滑液囊支原体的病原检测、预防早期感染需要标准、有效评价方法；进行环境消毒后针对滑液囊支原体病原杀灭效果评价缺少操作性强、对比性高的参考方法。

发明内容

本申请的目的在于提供一种规模化鸡场环境中滑液囊支原体的检测方法，以解决规模化鸡场环境消毒后，针对滑液囊支原体病原杀灭效果评价缺少操作性强、对比性高参考方法的问题。

根据本申请的实施例，提供了一种规模化鸡场环境中滑液囊支原体的检测方法，包括：

采样人员带一次性塑料手套和口罩，用消毒后的镊子将无菌棉纱布浸入装有5mL生理盐水的10mL离心管内润湿；

在采样位置确定50cm长的采样区域，用润湿的棉纱布往返擦拭5次，塞入所述离心管并封口；

提取封口后离心管内液体核酸进行滑液囊支原体病原的检测。

进一步地，所述采样位置包括墙面，地面，料线，水线和蛋架，所述墙面包括高处墙面和低处墙面，所述地面包括通道和粪道。

进一步地，所述方法还包括：每个采样位置至少采集6份样品，每个采样位置的采样区域面积至少50平方厘米。

进一步地，所述封口后的离心管在4℃～10℃条件下至多保存2天。

进一步地，所述提取封口后离心管内液体核酸进行滑液囊支原体病原的检测包括：

将封口后离心管震荡混匀，取0.25mL样液提取样液DNA；

将所述样液DNA用滑液囊支原体通用引物扩增目的片段，得到扩增产物；

将所述扩增产物通过1.5％琼脂糖凝胶电泳，观察206bp处特异性条带，判断所述采样位置是否存在滑液囊支原体病原。

进一步地，所述滑液囊支原体病原的检测还包括：

获取检测样品总数和存在滑液囊支原体病原的样品数量；

根据所述检测样品总数和所述存在滑液囊支原体病原的样品数量，计算滑液囊支原体病原检出率。