[发明专利]一种细胞规模化培养方法、纯化方法及细胞信使在审
| 申请号： | 201910405915.3 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110093312A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 张永国;何君 | 申请（专利权）人： | 张永国 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 王焕 |
| 地址： | 100000 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 无血清培养基 规模化培养 细胞 生物培养器 细胞成活率 培养细胞 细胞信使 培养基 规模化 上清液 微载体 血清 灭菌 接种 | ||
1.一种细胞规模化的培养方法，其特征在于，将待培养细胞与灭菌后的GE微载体接种于含血清的培养基，在生物培养器中培养，然后换成无血清培养基，在无血清培养基中继续培养4-7d，收集上清液；
所述待培养细胞为脐带间充质细胞、脂肪细胞中的一种或两种；
优选地，所述待培养细胞的接种密度为(8-9)*103cell/ml；
更优选地，所述待培养细胞的接种密度为8.6*103cell/ml。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，在无血清培养基培养过程中，氧气的浓度为4-7wt％，优选地氧气的浓度为5wt％。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种后10-15rpm搅拌培养24-26h，再以18-30rpm搅拌培养24-72h。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，培养24-72h后，吸弃培养上清液，采用生理盐水洗涤，添加胰酶消化后，加入含血清的培养基，微载体脱落后，再添加新的GE微载体，即可。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，添加胰酶消化40-60s。
6.权利要求1-5任一项所述的培养方法所得细胞的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
将细胞采用中空纤维柱提取得到100000MW以下的组分，进行浓缩过滤、辐照灭菌、冷冻干燥即可。
7.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，在中空纤维柱中反复提取1-2次。
8.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，冷冻干燥的温度为-40～-50℃之间。
9.一种细胞信使，采用权利要求1-8任一项所述的培养方法培养得到。
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