[发明专利]3-肼基苯甲酸衍生化葡聚糖在MALDI-TOF-MS质量校准中的应用

说明书

本发明属于质谱检测领域，具体公开了一种反应型基质3‑肼基苯甲酸衍生化葡聚糖在MALDI质谱质量校准中的应用。3‑肼基苯甲酸与还原糖末端的半缩醛发生成腙反应，该反应衍生化效率高，且利用靶板在线衍生，操作简便。利用该衍生策略，在正负离子模式下均可检测到衍生化产物。且3‑肼基苯甲酸中所带羧酸根显著提高了还原糖在负离子模式下的离子化效率。本发明用3‑肼基苯甲酸衍生化的葡聚糖作为MALDI质谱的质量校准物，相邻信号峰之间质量相差162Da，对应一个葡萄糖残基，实现了同时在正负离子模式下的精确校准。

技术领域

本发明涉及质谱检测技术领域，具体涉及3-肼基苯甲酸(3-HBA)作为反应型基质衍生化葡聚糖在MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)质量校准中的应用。

背景技术

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)被广泛应用于大分子的质量测定，如蛋白质、多糖及聚合物等。精确的质荷比校准是质谱进行物质分析的首要前提，因此选择合适的质量校准物至关重要。

作为质量校准物的化合物应具备：(1)精确的谱图特征，准确的分子量；(2)校准范围内谱峰丰富且相邻质谱峰差值合适；(3)容易制备，价格便宜；(4)易于储存，保质期长；(5)纯度高等特点。目前常用于校准物的物质有蛋白质、多肽混合物等，但该类校准物分离纯化成本高，对环境敏感，保存条件有较高的要求；金属簇合物，如[Cs_nI_n-1]⁺和[Cs_n-1I_n]^-簇合物可用于MALDI-MS正负离子模式校准，但使用该类校准物时，随着分子量增加，峰强度明显减弱；聚合物，如聚乙二醇、聚乙烯乙二醇等，T.Gruending等用聚丙胺酸校准MALDI质谱质量数，可在m/z 1000～3500范围内进行校准，但正负离子的校准需分别用到DHB和CHCA作为基质，操作较繁琐。基于此，设计和开发新型MALDI质谱校准物具有重要的意义。

发明内容

本发明提供3-肼基苯甲酸(3-HBA)作为反应型基质，Dextran 2000(D2000)为还原性葡聚糖，通过成腙反应衍生化该聚合物。该反应衍生化效率高，在正负离子模式下均能得到很强的衍生化产物信号，可用于MALDI-TOF MS的质量校准。同时，对成腙产物进行二级碎裂，可得到丰富的碎片信息，进而用于二级质量的精确校准。有机酸基质DHB和3-HBA混合使用，可显著提高糖类化合物的衍生化效率和检测灵敏度。其中，DHB为催化型基质，而3-HBA为反应型基质，DHB和3-HBA均为碳水化合物的优良基质，因此，过量的衍生化试剂不需要分离，简化了操作步骤。本发明所述的3-HBA结构式如式(1)所示：

3-肼基苯甲酸(3-HBA)作为反应型基质衍生化葡聚糖在MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)质量校准中的应用

本发明的3-HBA作为反应型基质衍生化葡聚糖在MALDI-TOF-MS质量校准中的应用，具体步骤如下：

(1)试剂配制

配制DHB(2,5-二羟基苯甲酸)甲醇溶液，将3-HBA(3-肼基苯甲酸)溶于甲醇和二甲亚砜的混合溶剂中得到3-HBA溶液，然后将DHB甲醇溶液和3-HBA溶液混合得到DHB/3-HBA混合基质溶液，将葡聚糖(D2000)溶于水中得到葡聚糖水溶液；

(2)点样

分别取等体积的葡聚糖水溶液和DHB/3-HBA混合基质溶液，依次点在MALDI-TOF-MS仪器的靶板的同一点上，在靶板上直接进行吸打混匀，得到点样后的靶板；

(3)靶板衍生化反应

点样后的靶板在60～70℃下反应20～40min，样品点完全干燥，得到含质量校准物的靶板；

(4)质谱校准