[发明专利]一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及其应用

说明书

本发明提供一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及其应用，所述添加剂为亚甲基蓝，且所述亚甲基蓝的添加浓度为10～200nmol/L。本发明还提供了所述卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高体外卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育中的应用；在提高卵母细胞成熟质量中的应用，以及在提高卵母细胞的抗氧化能力中的应用。本发明提供的添加剂添加到卵母细胞体外成熟培养液中，用于体外培养卵母细胞和早期胚胎，可提高动物卵母细胞体外成熟率，早期胚胎卵裂率、囊胚率。提高体外卵母细胞的成熟质量，提高卵母细胞的抗氧化能力。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及其应用。

背景技术

现代生物学和生物医学研究表明猪的生物学特性和遗传特性与人类具有相当高的同源性，并由此使得猪的转基因器官和核移植研究得到深入开展，同时对猪卵母细胞IVM的标准也在不断的提升。而在卵母细胞体外成熟的过程中，大量的氧化应激可导致卵母细胞线粒体形态和功能的改变，进而影响三磷酸腺苷的合成，干扰卵母细胞内的减数分裂，使得卵母细胞内非整倍体染色体增多，造成胚胎DNA损伤和早期发育停滞。尽管我国许多学者在猪卵母细胞IVM上进行了大量的研究工作，但是迄今为止仍没有一个成熟完善的体外培养体系能够得以广泛有效的推广与应用。因此，优化卵母细胞体外成熟培养条件对提高体外胚胎生产效率具有重要意义。

谷胱甘肽(GSH)在细胞成熟中参与细胞氧化、保护细胞的一种重要的物质，卵子内的GSH含量越高，在随后的体外受精囊胚发育中成熟越好。卵母细胞成熟中GSH起着重要的作用，它可以维持纺锤体在减数分裂中的形态且使纺锤体免受氧化应激。谷胱甘肽的浓度可反应卵母细胞胞质成熟质量，谷胱甘肽的浓度被认为是胞质成熟的标志。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂添加到卵母细胞体外成熟培养液中用于体外培养卵母细胞，可提高体外发育卵母细胞成熟率，提高体外发育卵母细胞成熟质量，提高卵母细胞的抗氧化能力。

本发明是这样实现的：

本发明目的之一在于提供一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂，所述添加剂包括亚甲基蓝，且所述亚甲基蓝的添加浓度为10～200nmol/L。

本发明的目的之二在于提供一种卵母细胞体外成熟培养液，所述卵母细胞体外成熟培养液添加有亚甲基蓝。

优选地，所述卵母细胞体外成熟培养液包括：终浓度为10～200nmol/L的亚甲基蓝；浓度体积比为75％～85％的卵母细胞基础培养液；浓度为10IU/ml的孕马血清促性腺激素；浓度为10IU/ml的人绒毛膜促性腺激素；浓度为100IU/mL的青霉素；浓度为100ug/mL的链霉素；浓度比为8％～12％的卵泡液；浓度为0.1％的聚乙烯醇；浓度为3.05mM的葡萄糖；浓度为0.91mM的丙酮酸钠；浓度为0.57mM的L-半胱氨酸。

本发明的目的之三在于提供所述的卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高体外发育卵母细胞成熟率、早期胚胎卵裂率和囊胚率中的应用。

在提高体外发育卵母细胞成熟率、早期胚胎卵裂率和囊胚率上，所述添加剂为终浓度为10～200nmol/L的亚甲基蓝。优选地，所述亚甲基蓝的添加浓度为10～50nmol/L。最为优选地，所述亚甲基蓝的添加浓度为10nmol/L。

本发明的目的之四在于提供所述的卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高卵母细胞成熟质量中的应用。

在提高体外发育卵母细胞成熟质量上，所述亚甲基蓝的添加浓度为5～15nmol/L。最为优选地，所述亚甲基蓝的添加浓度为10nmol/L。

本发明的目的之五在于提供所述的卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高卵母细胞的抗氧化能力中的应用。

在提高体外发育卵母细胞的抗氧化能力上，所述添加剂为终浓度为50nmol/L的亚甲基蓝。