[发明专利]曼地亚红豆杉内生真菌粗提物及应用

说明书

本发明提供了一种曼地亚红豆杉内生真菌粗提物、提取方法及应用。该粗提物能够显著抑制肿瘤细胞的活性，有潜力成为开发高活性新型抗肿瘤药物先导化合物。此外，该粗提物为寻找产紫杉醇类似物提供了资源保障和奠定了基础。最后，该粗提物作为一种紫杉醇替代物，在保护红豆杉资源方面具有极其重要的意义。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，主要涉及一种曼地亚红豆杉内生真菌的粗提物及其在抗癌方面的应用。

背景技术

红豆杉(Taxus chinensis)，又称紫杉，也称赤柏松，中国国家一级珍稀保护树种，也是世界上公认的濒临灭绝的天然珍稀抗癌植物。红豆杉为中国特有树种，产于甘肃、陕西、四川、云南、贵州、湖北、安徽(黄山)等地，常生于海拔1000-1200米以上的高山上部。由于在自然条件下红豆杉生长速度缓慢，再生能力差，所以很长时间以来，世界范围内还没有形成大规摸的红豆杉原料林基地。然而，由于红豆杉的树皮有抗癌物质——紫杉醇，所以有许多人进入林中来剥树皮，使得红豆杉的数量急剧下降，许多红豆杉的生命在一夜之间戛然而止，因此，寻找一种紫杉醇替代物迫在眉睫。

植物内生菌是指那些在生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌。研究表明，植物内生菌代谢产物或有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等作用，具有良好的研究开发前景。

本发明的研究人员从重庆市青峰山曼地亚红豆杉中分离纯化了数百株内生真菌，为寻找产紫杉醇类似物及新型抗肿瘤活性天然产物的内生真菌提供了资源保证和奠定了基础。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一，在于提供一种曼地亚红豆杉内生真菌粗提物，技术方案如下：

曼地亚红豆杉内生真菌粗提物，所述内生真菌为青霉属真菌。

进一步，所述粗提物是一种发酵粗提物。本发明的研究人员从重庆市青峰山曼地亚红豆杉中共分离纯化得到457株内生真菌，建立了曼地亚红豆杉植物内生真菌菌种库，为寻找产紫杉醇类似物及新型抗肿瘤活性天然产物的内生真菌提供了资源保证和奠定了基础。

本发明的目的之二，在于提供一种曼地亚红豆杉内生真菌粗提物的提取方法，技术方案如下：

曼地亚红豆杉内生真菌粗提物的提取方法，步骤如下：

1)从红豆杉的根、茎、叶、树皮和根际土壤等处分离目标真菌；

2)将分离得到的内生真菌于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(土豆200g，蔗糖10g，葡萄糖10g，乙酸钠1.66g，硫酸镁1.02g，蛋白胨0.5g，琼脂糖10g，水1000ml)上30℃培养一周；

3)将步骤2)中的培养产物转移到MID(土豆200g，蔗糖10g，葡萄糖10g，乙酸钠1.66g，硫酸镁1.02g，蛋白胨0.5g，水1000ml)培养基里，以160rpm、30℃摇床培养3周；

4)将步骤3)中的发酵产物用乙酸乙酯超声提取1-3次；

5)将步骤4)中的有机组合物进行蒸发得到曼地亚红豆杉内生真菌发酵粗提物。

本发明目的之三，在于提供曼地亚红豆杉内生真菌粗提物的相关应用，技术方案如下：

曼地亚红豆杉内生真菌粗提物在制备抗肿瘤药物中的应用。

进一步，所述粗提物可以显著抑制肿瘤细胞的活性；所述粗提物对肿瘤细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration，IC₅₀)值为0.01-3.1μg/ml。表明所述粗提物具有进一步研究的价值，极有可能从中发现高活性新型抗肿瘤药物先导化合物。

一种抗肿瘤的药物，所述药物包括曼地亚红豆杉内生真菌粗提物和药学上可接受的载体和助剂。