[发明专利]同时检测生物样品中多种生物小分子的方法及用于其的多维液相色谱分析装置

说明书

本发明涉及一种同时检测生物样品中多种生物小分子的方法及用于其的多维液相色谱分析装置。该方法使用具备第一维的前处理柱、第二维的分析柱和检测器的多维液相色谱分析装置，所述前处理柱为尺寸排阻色谱柱，所述分析柱为液相色谱柱，该方法包括如下步骤：将生物样品使用前处理柱进行处理，以去除生物样品中包含的生物大分子，并且将生物样品中的多种生物小分子捕集到前处理柱上；将捕集的多种生物小分子从前处理柱上洗脱；将洗脱出的多种生物小分子使用分析柱进行分离；将分离的所述多种生物小分子进行检测。

技术领域

本发明涉及生物分子的分离和检测领域，尤其涉及一种同时检测生物样品中多种生物小分子的方法及多维液相色谱分析装置。

背景技术

生物体内所含有的氨基酸、小肽、维生素、脂类等小分子在生物生长、代谢过程中发挥着重要的作用，它们的分析检测在生命科学、生物化学、医学、药学等领域有重要意义。其中，维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类有机物质，机体缺乏维生素将引起代谢障碍，并发生各种疾病，这类疾病统称为维生素缺乏症。

目前，根据溶解性可将维生素分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。水溶性维生素包括B族维生素、维生素C等；脂溶性维生素包括维生素A、D、E、K等。其中，维生素D具有抗佝偻病作用。维生素K对正常的血液凝结有重要作用。维生素A又称视黄醇，具有维持视觉、维护上皮组织细胞、促进免疫球蛋白合成、维持骨骼生长发育、抑制肿瘤等重要生理功能。维生素E包括生育酚和三烯生育酚两类共8种化合物，α-生育酚是自然界中分布最广泛含量最丰富活性最高的维生素E形式，其通过清除过氧化物来保护不饱和脂肪酸，并且在癌症、心血管疾病、白内障、老年性黄斑变性等疾病中起到重要的抗氧化剂作用。维生素E临床检测中主要为检测α-生育酚。

维生素最早期的检测用于一般的添加食品，如婴儿配方食品、谷类产品和果汁等。European Directive 2002/46EC制定了一系列关于食品添加剂标识及检测添加过维生素的食品中标注的维生素含量的法规。我国国家标准GB5413～2010对婴幼儿配方食品与乳品中维生素含量也有明确的规定，标准中涉及的方法有微生物法及高效液相色谱法。这些方法虽然灵敏度高、结果准确，但有如下局限性：整个实验周期长，批次检测结果重复性差，检测结果误差较大，每次只能进行单一维生素种类的检测，难以直接用于成分复杂的生物样品的检测。

近年来，作为同时检测多种维生素的方法，开发了基于液相色谱技术或液相串联质谱技术的多种方法。例如，专利文献1和专利文献2分别公开了采用荧光检测器或质谱检测器，在数分钟内同时检测血清中维生素A和维生素E的方法，但是，这些方法中，在使用液相色谱法或液相色谱串联质谱法进行分析之前，需要对样品进行如下的前处理：使用正己烷对除蛋白后的血清样品进行萃取，离心分离后，将上清液吹干，最后复溶，制成上清液样品。该前处理过程中，操作繁复，并且由于人为因素可能造成提取效率偏差较大，无法得到稳定且准确的结果。

如上可见，现有技术中，样品的前处理在便捷性等方面尚有改善的空间，需要更加简单且自动化的前处理工艺来是实现血清中维生素A和维生素E的快速高通量分析。

引证文件列表

专利文献

专利文献1：CN106442754A

专利文献2：CN108107133A

发明内容

发明要解决的问题