[发明专利]一种纳米尺度siRNA递送系统

权利要求书

1.一种纳米尺度siRNA递送系统，其特征在于，粒径为100-200nm，按照下述步骤进行：

步骤1，星型寡聚精氨酸POSS-(C-G-R₈-G-W)₁₆基因载体的制备

将二烯丙基功能化的笼型聚倍半硅氧烷和寡聚精氨酸W-G-R₈-G-C均匀分散于四氢呋喃和水的混合溶液中，加入光引发剂，混合均匀后在紫外灯下照射下进行反应，反应结束后进行透析，冷冻干燥，得到星型寡聚精氨酸POSS-(C-G-R₈-G-W)₁₆粉末，二烯丙基功能化的笼型聚倍半硅氧烷和寡聚精氨酸的质量比2：(30—60)；

步骤2，弱酸敏感型聚阴离子PLL-g-Aco的制备

将ε-聚赖氨酸均匀分散在PBS溶液中并冷却至0℃，再向其中加入顺式乌头酸酐粉末并添加氢氧化钠水溶液，以使整体pH维持在8—9，继续搅拌反应，以得到顺式乌头酸酐修饰的ε-聚赖氨酸；

步骤3，纳米尺度siRNA递送系统的制备

将步骤1制备的星型寡聚精氨酸粉末均匀分散在PBS溶液，得到第一溶液；再向第一溶液中加入siRNA，星型寡聚精氨酸与siRNA的质量比为(0.5-6)：1，涡旋并室温孵化，得到二元siRNA复合物溶液；

将步骤2制备的弱酸敏感型聚阴离子均匀分散在PBS溶液，得到第二溶液；向二元siRNA复合物溶液中加入第二溶液，星型寡聚精氨酸与弱酸敏感型聚阴离子的质量比为6：(1—5)，涡旋并室温孵化，获得三元siRNA复合物溶液，即纳米尺度siRNA递送系统。

2.根据权利要求1所述的一种纳米尺度siRNA递送系统，其特征在于，在步骤1中，寡聚精氨酸W-G-R₈-G-C的氨基酸序列为：Trp-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-Cys；四氢呋喃和水的体积比为(2：3)—(1：2)；二烯丙基功能化的笼型聚倍半硅氧烷和寡聚精氨酸的质量比2：(40—50)；选择在紫外灯下照射下反应10-15min，光引发剂为2-羟基-4'-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮，加入量为二烯丙基功能化的笼型聚倍半硅氧烷、寡聚精氨酸和光引发剂质量之和的0.05％-0.5％，优选0.1—0.5％。

3.根据权利要求1所述的一种纳米尺度siRNA递送系统，其特征在于，在步骤2中，ε-聚赖氨酸与顺式乌头酸酐的质量比为1：(1—5)，优选1：(1.5—4.5)；PBS溶液中，浓度为10mM，pH为8.5，ε-聚赖氨酸数均分子量为4200Da，搅拌反应时间为12—24小时。

4.根据权利要求1所述的一种纳米尺度siRNA递送系统，其特征在于，在步骤3中，siRNA为ERK2-siRNA或者Cy5-ERK2-siRNA；PBS溶液pH为7.4，浓度为10mM；星型寡聚精氨酸与siRNA的质量比为(2-6)：1；星型寡聚精氨酸与弱酸敏感型聚阴离子的质量比为6：(2—3)。

5.根据权利要求1所述的一种纳米尺度siRNA递送系统，其特征在于，在步骤3中，星型寡聚精氨酸粉末均匀分散在PBS溶液中，涡旋2min，得到第一溶液，再加入siRNA，涡旋1min，室温孵化20-60min，得到二元siRNA复合物溶液；向二元siRNA复合物溶液中加入第二溶液，涡旋1min，室温孵化20-60min；弱酸敏感型聚阴离子均匀分散在PBS溶液，涡旋2min，得到第二溶液，质量浓度为0.1-0.3mg/mL。