[发明专利]一种细胞组合物在癌细胞SMMC-7721上的应用在审
| 申请号： | 201910408507.3 | 申请日： | 2019-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN110511906A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 邢永梅;邓蒙蒙;程箫;刘丹;吴疆;王保如 | 申请（专利权）人： | 安徽瑞达健康产业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 34158 合肥方舟知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘跃<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市高新区*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞组合物 扩增 双特异性抗体 扩增培养 单抗 细胞培养 治疗 单个核细胞 组合物制备 复合细胞 技术难度 杀伤作用 细胞毒性 癌细胞 活化 肝癌 诱导 刺激 应用 | ||
1.一种细胞组合物，其特征在于：包括免疫细胞和抗体。
2.根据权利要求1所述细胞组合物，其特征在于：免疫细胞为γδT细胞和NK细胞共培养细胞系，抗体为PD-1/PD-L1单抗和/或双特异性抗体。
3.根据权利要求2所述细胞组合物，其特征在于：细胞组合物的制备方法如下：
(1)γδT细胞和NK细胞的复合细胞物的获得；
(2)步骤1中的复合细胞物与抗体混合获得细胞组合物。
4.根据权利要求2所述细胞组合物，其特征在于：细胞组合物中γδT细胞：NK细胞比例为0.5-20：10；细胞组合物中PD-1/PD-L1单抗和/或双特异性抗体含量为10-1000μg/ml细胞组合物。
5.一种细胞组合物的应用，其特征在于：细胞组合物应用于癌细胞SMMC-7721以及肝癌上，
所述组合物为权利要求1或权利要求2所述的细胞组合物中的一种。
6.根据权利要求3所述细胞组合物，其特征在于：γδT细胞和NK细胞的复合细胞物的获得方法如下：
(1)单个核细胞的制备：分离单个核细胞，用含体积百分比50％-100％的含10vt％FBS或自体血清的RMPI 1640和0％-50％X-vivo15的混合培养基重悬细胞，接种在培养瓶或培养袋中培养；
(2)γδT-NK细胞的诱导：加入含浓度为1-100μM的唑来膦酸和500～3000U/mL IL-2的混合培养基体外刺激4天后加入含有10～500ng/mL anti-human CD3Ab、10～500ng/mLanti-human CD28Ab、10～200ng/mL IL-15、10～200ng/mL IL-21、500～3000U/mL IL-2的混合培养基进行半量换液，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；
(3)培养2～3天，在培养瓶或培养袋中增补2mL无血清混合培养基和IL2细胞因子使得最终浓度与原始浓度相同，然后培养箱中培养4天；
(4)培养4天后，对细胞进行500g速度离心，离心5min后弃上清，然后将培养瓶或培养袋中的细胞分别转至T25细胞培养瓶中，再然后，更换5mL EX培养基进行扩增培养，依次加入无血清EX培养基、IL2细胞因子、IL-15、IL-21；
(5)培养3-4天后，在T25细胞培养瓶中增补5mL无血清EX培养基、IL2细胞因子、IL-15、IL-21、1-100μM的唑来膦酸，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为20mL；
(6)培养3-5天后，检测NK及γδT细胞比例及细胞总数。
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