[发明专利]一种产麦芽四糖淀粉酶的基因工程菌及其发酵工艺在审
| 申请号： | 201910408975.0 | 申请日： | 2019-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN110144320A | 公开（公告）日： | 2019-08-20 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;宿玲恰;杨亚楠 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12N9/24;C12N15/56;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 淀粉酶 麦芽四糖 基因工程菌 发酵工艺 生产成本 发酵工程技术 宿主 发酵产酶 基因工程 菌株产酶 生产菌株 发酵罐 酶活力 构建 菌株 | ||
1.一种产麦芽四糖淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌为宿主，以pHY300PLK为表达载体，表达氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的麦芽四糖淀粉酶。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以Bacillus subtilisWS11为宿主。
3.如权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述麦芽四糖淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种权利要求1-3任一所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，是将核苷酸序列为SEQ ID NO.1的麦芽四糖淀粉酶基因连接到表达载体上，然后在转化到枯草芽孢杆菌中，筛选正确的转化子，即得到基因工程菌。
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述转化是通过化学转化法进行的。
6.一种生产麦芽四糖淀粉酶的方法，其特征在于，所述方法是应用权利要求1-3任一所述的基因工程菌进行发酵。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是将种子培养液接入发酵罐，以25-35％氨水控制pH6.5-7.5，培养温度33-37℃。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，发酵时将溶氧维持在30-50％，当溶氧迅速上升时，开始流加补料培养基，当麦芽四糖淀粉酶酶活开始下降时结束培养。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述补料培养基(g/L)为：葡萄糖240-260，工业蛋白胨170-190，豆粕粉65-75，微量元素液TES 18-23mL；微量元素液TES(g/L)：CaCl20.5，ZnSO4·7H2O 0.18，MnSO4·H2O 0.1，Na2-EDTA 10.05，FeCl3 8.35，CuSO4·5H2O0.16，CoCl2·6H2O 0.18，所述工业蛋白胨与豆粕粉的质量比为2-3:1。
10.权利要求1-3任一所述的基因工程菌在制备麦芽四糖淀粉酶或含麦芽四糖淀粉酶的产品中的应用。
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