[发明专利]一种单细胞粘附力测量方法

说明书

本发明涉及生物科学领域，一种单细胞粘附力测量方法，单细胞粘附力测量装置包括扫描电镜腔、储气罐、水蒸汽源、进气管、真空室、电子枪、电子探测器、位移台I、致动器、微操纵器、位移台II、衬底、细胞样品、计算机、扫描电镜、气管和电缆，基于扫描电镜技术，将扫描电镜技术与特殊的细胞操纵技术相结合，采用特殊的微操纵器及衬底，在对细胞进行操纵的同时能够实时地进行粘附力测量，并且由于微操纵器是从细胞的下侧来操纵细胞，因此能够减小测量过程中细胞的形变，测量结果准确，实验方法简单。

技术领域

本发明涉及生物科学领域，尤其是一种采用特殊的微操纵器及衬底的一种单细胞粘附力测量方法。

背景技术

细胞与材料之间的粘附力是细胞重要的特性，对细胞的培养及再生有重要的意义，通常通过测量细胞与某种材料制成的衬底之间的粘附力来定性地研究，现有技术中通常采用原子力显微镜、微量移液器等装置通过操纵细胞的方法来研究细胞的粘附力，其缺点是在对细胞进行操纵及测量过程中，会造成细胞有较大的形变，从而影响测量结果的准确性，所述一种单细胞粘附力测量方法能够解决问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明方法基于扫描电镜技术，采用特殊的微操纵器及衬底，在对细胞操纵的同时进行粘附力测量，并能够减小测量过程中细胞的形变。

本发明所采用的技术方案是：

单细胞粘附力测量装置包括扫描电镜腔、储气罐、水蒸汽源、进气管、真空室、电子枪、电子探测器、位移台I、致动器、微操纵器、位移台II、衬底、细胞样品、计算机、扫描电镜、气管和电缆，xyz为三维坐标系，进气管的一端位于扫描电镜腔内、另一端位于扫描电镜腔外并通过气管分别连接储气罐和水蒸汽源，真空室安装于扫描电镜腔的上面，电子枪连接于真空室的下端，电子枪、电子探测器、位移台I、致动器、微操纵器、位移台II、衬底和细胞样品均位于扫描电镜腔内，电子探测器、位移台I、致动器和位移台II均分别通过电缆连接计算机，位移台II位于电子枪下方的16厘米处，衬底置于位移台II的上面，衬底的上表面吸附有细胞样品，衬底的上部由平行的条状凸起和空隙组成；当电子枪向衬底发射电子，并与衬底表面相互作用后，其中一部分形成反射电子，电子探测器位于位移台II的侧上方，用于探测衬底表面的反射电子，电子探测器能够将探测到的电子信息输入计算机，通过计算机能够控制位移台I和位移台II的三维移动；微操纵器由一块长度为200微米、宽度为40微米、厚度为6微米的金属片加工而成且具有弹性，微操纵器具有前端和后端，前端具有平行排列的三个操纵指，操纵指具有相互呈20度角的前段和后段，微操纵器的后端通过致动器连接于位移台I，计算机能够控制致动器并带动微操纵器在xz平面内以微操纵器的后端为轴线转动，转动范围为正负15度角；微操纵器的弹性系数为0.7牛/米，微操纵器前端的三个操纵指均是长度为30微米、宽度为0.8微米、高度为4微米，相邻操纵指的间隔为1.2微米，操纵指的前段的长度为8微米、宽度为0.8微米、高度为1微米；衬底上部的每个条状凸起的宽度均为1微米、高度为6微米，相邻的条状凸起之间的空隙宽度为1微米，衬底由聚甲基丙烯酸甲酯PMMA片微加工而成，衬底表面镀有厚度为20微米的金膜；细胞样品中的细胞的尺寸范围为2微米至4微米，细胞样品中包含不同种类的细胞。

所述一种单细胞粘附力测量方法的步骤为：

步骤一，采用扫描电镜监测微操纵器与衬底的相对位置，并通过计算机控制位移台I及位移台II在xyz方向的三维移动，以使得微操纵器与衬底相互接近；

步骤二，通过扫描电镜得到衬底及细胞样品的图像，选择衬底上表面的一个细胞作为待测细胞来进行后续测量实验，通过计算机控制位移台II移动，使得微操纵器的操纵指移动至所述待测细胞的侧上方距离为100微米处；

步骤三，通过计算机控制致动器并带动微操纵器，使得微操纵器的操纵指的前段与衬底上部的待测细胞所在的条状凸起之间的空隙平行；

步骤四，通过计算机控制位移台II向上移动，使得微操纵器的操纵指嵌入待测细胞所在的条状凸起之间的空隙中；