[发明专利]转录因子C/EBPα作为ACOX1启动子区的转录因子的应用

说明书

本发明提供一种转录因子C/EBPα作为ACOX1启动子区的转录因子的应用，具体地，从牛基因组DNA中克隆了5条ACOX1启动子缺失片段，连接至双荧光素酶报告载体pGL3‑Basic中构建了5个重组的双荧光素酶报告载体，分别与C/EBPα过表达载体共转染，结果显示5个载体的荧光活性均显著降低，表明转录因子C/EBPα抑制了ACOX1基因的转录，从而明确了转录因子C/EBPα对ACOX1的转录调控作用。结合生物信息学分析与定点突变技术，结果显示‑1142～‑1129为C/EBPα转录因子位点。本发明为ACOX1的表达调控运用于家畜肉质遗传改良分子调控机制的研究提供依据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种转录因子C/EBPα作为 ACOX1启动子区的转录因子的应用。

背景技术

肌内脂肪含量影响着肉质的感官品质性状(多汁性、嫩度和风味)，同时与胴体品质有很强的关联性，所以在实际生产中肌内脂肪含量也常被用作肉质遗传改良的一个重要依据(Liu and Ngadi，2014)。在牛上，肌内脂肪所呈现出的大理石花纹(雪花牛肉)更是衡量牛肉质量等级的重要指标(Mannen， 2011)。与其他部位脂肪相比，牛肌内脂肪含有更高水平的多不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸(Troy et al.，2016)。雪花牛肉不仅口感好，而且含有大量人体所需的脂肪酸，并且随着牛肉内脂肪含量的增高，胆固醇的含量反而降低了，营养价值显著高于普通牛肉。此外，随着人们物质基础和生活水平的提高，健康的饮食观念越来越受到重视，而牛肉作为一种高蛋白、低脂肪的优良肉类食品刚好迎合了大众的消费观念，同时也对牛肉品质提出了更高的要求。目前，如何增强肉牛肌内脂肪沉积，提高大理石花纹的比例是肉牛产业关注的焦点。

高等生物基因的表达受到细胞内外环境的精细调控，因而具有严格的时间及空间有序性。基因的表达调控是一个复杂且有序的过程，由多阶段调控水平共同完成，这主要包括转录前、转录、转录后、翻译、翻译后五个水平。其中转录水平的调控是最关键的环节。启动子是转录水平上一个重要的调控元件，发挥着类似“开关”的作用。启动子本质是一段位于结构基因5’端上游区域的 DNA序列，其本身不具备调控基因的功能，而是与众多的特定转录因子相互作用，特异的调控基因的表达。启动子功能研究使我们更深入的了解生物生长发育的调控机制，对于研究功能基因的表达调控具有重要意义。

ACOX1是过氧化物酶体脂肪酸β-氧化第一步脱氢反应的限速酶，它主要在过氧化物酶体增殖物中被激活并且氧化中长链的直链脂肪酸(Wang et al.， 2014)。已有文献报道ACOX1基因与牛肉质等级和大理石花纹指标相连(Jiao et al.，2011；Lee et al.，2010)，而且我们前期的研究结果也初步表明ACOX1 基因能够促进前脂肪细胞的脂肪沉积。

因此，找出对ACOX1的启动子区具有转录调控作用的转录因子，将会为 ACOX1的表达调控运用于家畜肉质遗传改良分子调控机制的研究提供依据。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了转录因子C/EBPα作为 ACOX1启动子区的转录因子的应用。明确了转录因子C/EBPα对ACOX1的转录调控作用，既明确了二者之间的直接靶向关系又丰富了ACOX1的调控网络，为ACOX1的表达调控运用于家畜肉质遗传改良分子调控机制的研究提供依据。

本发明是这样实现的：

本发明目的之一在于提供转录因子C/EBPα作为ACOX1启动子区的转录因子的应用。

本发明的目的之二在于提供转录因子C/EBPα在抑制ACOX1的表达中的应用。

本发明的目的之三在于提供C/EBPα的靶基因牛ACOX1的结合位点。

本发明的验证过程及结果如下：