[发明专利]一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：其步骤为：

(1)用Mabselect SuRe LX捕获GLP-1-Fc融合蛋白；

(2)用Capto Q ImpRes离子交换层析进一步去除降解片段；

(3)用CHT I型填料去除大量的聚集体。

2.根据权利要求1所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：根据步骤(1)，其具体操作步骤为：

(1.1)用亲和平衡液平衡层析柱4个柱体积；

(1.2)上样，上样保留时间为4-10min；

(1.3)完成上样后，用亲和平衡液再平衡3个柱体积，然后用淋洗液冲洗4个柱体积；

(1.4)再用醋酸盐冲洗层析柱3个柱体积，样品用醋酸盐洗脱，收集主峰；

(1.5)用NaOH清洗3个柱体积，用平衡液平衡至pH稳定后，2个柱体积的乙醇保存层析柱。

3.根据权利要求2所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤(1.1)中，亲和平衡液为25mM Tris，25mM NaCl，pH7.5；

步骤(1.3)中，淋洗液为25mM Tris，0.3M NaCl，pH7.5；

步骤(1.4)中，冲洗的醋酸盐为50mM醋酸盐-pH4.5，洗脱的醋酸盐为50mM醋酸盐-pH＝3.5；

步骤(1.5)中，NaOH为0.1M NaOH，乙醇为20％乙醇。

4.根据权利要求2所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤(1.4)中，收集主峰为收集紫外280nm处的主峰。

5.根据权利要求4所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：收峰参数为：开始收集的UV＝80mAU，终止收集的UV＝80mAU。

6.根据权利要求1所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：根据步骤(2)，其具体操作步骤为：

(2.1)用阴离子平衡液平衡层析柱3个柱体积；

(2.2)上样，上样载量≤30mg/ml，上样时保留时间为4-10min；

(2.3)上样结束后，用平衡液冲洗层析柱5个柱体积，样品用洗脱液洗脱，收集主峰；

(2.4)用再生液冲洗层析柱3个柱体积，最后用2个柱体积的乙醇保存层析柱。

7.根据权利要求6所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤(2.1)中，阴离子平衡液为30mM Tris-HCl，85mM NaCl，pH7.8；

步骤(2.3)中，洗脱液为30mM Tris-HCl，190mM NaCl，pH7.8；

步骤(2.4)中，乙醇为20％的乙醇。

8.根据权利要求6所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤(2.3)中，收集主峰为收集紫外280nm处的主峰。

9.根据权利要求8所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：收峰参数为：开始收集的UV＝100mAU，终止收集的UV＝100mAU。

10.根据权利要求1所述的一种纯化Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于：根据步骤(3)，其具体操作步骤为：

(3.1)用30mM Tris，5mM PB，5％PEG1000，pH8.0，cond8.5ms/cm平衡层析柱5个柱体积；

(3.2)样品调节到与平衡液一致的条件上样，收集流穿的目的蛋白，样品上样结束后继续用平衡液平衡，直至样品收集完毕；

(3.3)样品收集完成后用500mM PB再生层析柱3个柱体积，再用0.5M NaOH清洗3个柱体积。