[发明专利]一种抗TNF-α抗体

说明书

一种抗TNF‑α抗体，其是通过构建未经过抗原免疫刺激的天然兔源噬菌体抗体文库，以TNF‑α重组蛋白作为靶点，经过3轮筛选富集，获得了特异性结合TNF‑α的单链抗体。该抗体可作为特异性捕获TNF‑α抗体、TNF‑α信号抗体等应用。同时构建成功的天然抗体库，还可直接应用于更多的靶点筛选。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种抗TNF-α抗体。

背景技术

2018年诺贝尔化学奖颁发给了噬菌体展示技术发明科学家Smith和Winter，噬菌体展示技术自发明以来，已成功应用于抗体药物开发。Winter利用此技术研发出了第一个全人的抗体药物，也就是大名鼎鼎的遥望阿达木单抗，用于治疗类风湿性关节炎、强制性脊柱炎、银屑病等，累计销售额已高达上千亿美金。

相比传统的杂交瘤融合技术制备单克隆抗体，噬菌体展示技术制备单克隆抗体可不经过动物免疫，直接从构建的文库中获得抗原特异性结合抗体。同时，噬菌体展示技术可直接获得抗体的基因序列，快速实现抗体的改造和大规模重组表达。噬菌体展示技术将抗体的重链和轻链可变区基因融合展示在噬菌体表面，通过在体外模拟抗体免疫系统的特异性靶标结合作用，将展示在噬菌体表面的重链和轻链在体外与固定化抗原进行筛选。经过几轮的吸附-洗杂-洗脱-扩增的淘选，最终富集出特异性与抗原相互作用的噬菌体。经过测序分析最终获得抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列。理论上，通过构建一个超大库容的噬菌体抗体文库，可获得任意抗原相互作用的抗体。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应。在许多病理状态下产生增多，包括败血症、恶性肿瘤、心脏衰竭和慢性炎性疾病。在重症类风湿关节炎患者的血液及关节中都可发现肿瘤坏死因子增多。临床结果证实TNF-α的拮抗剂可有效治疗TNF-α增高的一些疾病，如类风湿关节、银屑病等。抗体由于其高特异性和高稳定性，可作为拮抗剂应用。目前最典型的针对TNF-α的抗体拮抗剂阿达木单抗早已成功入市，应用于相关疾病治疗。

发明内容

本发明构建了天然兔源噬菌体抗体文库，并从中成功筛选到抗TNF-α抗体。

更具体地，本发明公开了抗TNF-α抗体，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID No:2所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

更具体地，本发明中公开的抗TNF-α抗体为单链抗体。

更具体地，本发明中公开的抗TNF-α抗体是通过从天然兔源噬菌体文库筛选获得的，噬菌体展示技术可直接获得抗体的基因序列，快速实现抗体的改造和大规模重组表达，由此大大提高了效率。

本发明还公开了一种分离的DNA分子，所述的DNA分子编码上述的抗TNF-α抗体。

所述的DNA分子包括抗TNF-α抗体的轻链可变区和重链可变区的编码序列；所述轻链可变区的编码序列如SEQ ID No:1所示，所述重链可变区的编码序列如SEQ ID No:3所示。

本发明还公开了一种载体，包含上述分离的DNA分子。

本发明还公开了一种细胞系，该细胞系表达上述的抗TNF-α抗体，或包含上述分离的DNA分子，或包含上述载体。

本发明还公开了一种基因工程菌，该基因工程菌表达上述抗TNF-α抗体，或包含上述分离的DNA分子，或包含上述载体。

本发明还公开了检测或治疗试剂盒，该试剂盒包括了上述TNF-α抗体，或上述分离的DNA分子，或上述载体，或上述细胞系，或上述基因工程菌。

同时，本发明还公开了抗TNF-α抗体的制备方法：TNF-α重组蛋白表达；天然兔源噬菌体文库构建；抗TNF-α抗体单链抗体筛选与获得。