[发明专利]一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种人体内钙卫蛋白含量的检测试剂盒及其制备方法，包括试剂R1，其为包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒；以及试剂R2，其为包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒。本发明克服了现有的胶乳免疫比浊法钙卫蛋白检测试剂盒中试剂R1以及试剂R2在使用过程中会出现混合不均的现象，导致试剂空白以及反应幅度波动，同时试剂R2中的多抗会与Ⅷ型胶原、补体C1q和Ⅷ因子有交叉反应，影响测试结果准确性，本发明中的试剂R1以及R2均为胶乳试剂，提升两者的混合均匀性，避免出现试剂空白以及反应幅度大幅波动的现象；通过将钙卫蛋白单抗替换传统试剂中使用的钙卫蛋白多抗，避免了额外的交叉反应，提升了试剂的检测精确性以及稳定性。

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种人体内钙卫蛋白含量的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

钙卫蛋白(calprotectin)是由激活的中性粒细胞分泌的一种小分子蛋白质复合物，钙卫蛋白的水平高低反映了中性粒细胞的激活程度。近年研究证实钙卫蛋白水平与自身免疫性疾病如风湿病和炎症性肠病(IBD)等疾病的炎症活动程度密切相关，如粪便钙卫蛋白检测已成为IBD已成为疾病治疗疗效判断的“金标准”。然粪便钙卫蛋白检测时存在病人依从性差、检测结果不稳定等缺点，血清钙卫蛋白测定是一个可以避免这些缺点的较好选择，国外研究者用ELISA方法检测已得到了证实。

酶联免疫分析法灵敏度高，但操作繁琐，难于实现全自动化检测；而胶乳增强免疫比浊法(Latex-enhanced turbidimetric immunoassay)是一种体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子胶乳微球的表面交联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。

胶乳增强免疫比浊法的优势具体体现在：①省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤。②稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人类血清中钙卫蛋白的含量。③应用广泛：免疫比浊法的灵敏度足以检测到人类血清中钙卫蛋白的下限值，可完全满足临床检测要求。

常规的胶乳免疫比浊法(例如申请号为CN201611099869.1的一种纳米胶乳增强免疫比浊法测定钙卫蛋白的试剂盒)的R1是透明澄清的缓冲液，R2是交联着抗体的胶乳颗粒，此方法在检测时很有可能因为混合不均导致试剂空白和反应幅度有所波动，并且此方法的R2中交联的抗体一般是多抗，然而血液中Ⅷ型胶原、补体C1q和Ⅷ因子有交叉反应，最终导致测试结果准确性较差。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中的胶乳免疫比浊法人血清钙卫蛋白检测试剂盒试剂R1以及试剂R2在使用过程中会出现混合不均的现象，从而导致试剂空白以及反应幅度波动，同时现有技术中的试剂R2中的多抗会与Ⅷ型胶原、补体C1q和Ⅷ因子有交叉反应，从而影响最终测试结果的准确性的缺陷，通过改善R1、R2的配方将试剂R1与试剂R2均设置为胶乳试剂并分别在R1和R2上交联钙卫蛋白单抗，从而提高了两者的混合性，使得其稳定性以及试剂性能大大提升。

为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、R2、标准品以及质控品；

所述的试剂R1为包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；

所述的试剂R2为包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2；

所述的标准品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液；

所述的质控品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液。