[发明专利]基于谱效关系的制首乌的质量检测方法

说明书

本发明属于中药质量标准检测的技术领域，公开了制首乌的质量检测方法。本发明所述制首乌的质量检测方法基于HPLC‑DPPH联用技术，将制首乌的指纹图谱及清除DPPH活性指纹图谱与活性共有峰进行谱效相关性研究，以制首乌抗氧化效果来判断制首乌品质优劣，建立科学、完善的制首乌抗氧化质量评控标准。本发明所述质量检测方法响应快速、结果直观、定性准确、操作简单、重现性良好。

技术领域

本发明属于中药质量标准检测的技术领域，具体是涉及制首乌的质量检测方法，尤其是基于谱效关系的制首乌的质量检测方法。

背景技术

何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)又名多花蓼、紫乌藤、夜交藤等，是蓼科蓼族何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，长椭圆形，黑褐色。何首乌其块根又称生首乌，可以直接入药。生首乌味苦、甘、色，性微温，归肝、心、肾经，具有解毒、消痈、截疟和润肠通便的功效，临床上常用于疮痈、瘰疬、风疹瘙痒、久疟体虚、肠燥便秘等。

生首乌经过深加工，可得制首乌。生首乌经清蒸或用黑豆汁拌匀后蒸至内外均呈棕褐色，成为制首乌。制首乌表面黑褐色或棕褐色，凹凸不平。质坚硬，断面角质样，棕褐色或黑色。气微，味微甘而苦涩。制首乌功偏补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂，临床上为血虚微黄、眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软常用药。制首乌微温不燥，补而不腻，《本草纲目》云：“养血益肝，固精益肾，健筋骨，乌须发，为滋补良药”。制首乌作为传统的抗衰老中草药，功效卓著。文献报道制首乌具有延长细胞周期、提高DNA损伤后修复能力的作用，从而发挥延长机体平均寿命的功效。现代化学研究表明，制首乌主要含有蒽醌、二苯乙烯苷、磷脂、羟基蒽醌类衍生物及非淀粉多糖，还含有17种游离氨基酸，以及少量的铜、锌、铁、锰等人体必需微量元素。此外现代研究表明制首乌还具有较强的抗氧化作用，能降低心、肝、脑等组织中脂质过氧化物(LPO)的含量，提高机体组织细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及减少氧自由基对组织细胞的损害。

然而目前针对制首乌的质量标准均仅着眼于少数活性成分的定性分析，目前仍缺乏一个与药效明显关联并且具体量化的标准与方法。故而，目前尚缺乏对制首乌药材优劣性的有效科学的质量评估方法，尤其是检测制首乌药材抗氧化的优劣性的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种基于谱效关系的制首乌的质量检测方法，借助活性部位和统计学方法，将制首乌的指纹图谱及清除DPPH活性指纹图谱与活性共有峰进行谱效相关性研究，以制首乌抗氧化效果来判断其品质优劣的质量检测方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种制首乌的质量检测方法，包括如下步骤：

1)制备制首乌的醇溶部位；

2)建立HPLC色谱检测条件；

3)优化DPPH条件；

4)利用HPLC-DPPH联用技术进行在线抗氧化制首乌活性分析，根据制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱选取制首乌抗氧化活性共有峰，建立制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱和抗氧化活性的峰效函数关系；

5)以制首乌化学指纹图谱、清除DPPH活性指纹图谱和制首乌抗氧化活性共有峰建立质量标准，利用所建立的质量标准直接评价制首乌质量。

其中，制首乌的醇溶部位为水提醇沉上清液过大孔树脂后经95％乙醇洗脱的部位，制首乌水部位为水提醇沉上清液过大孔树脂后经水洗脱的部位。只有制首乌的醇溶部位、制首乌的水部位检测才能连接抗氧化活性检测装置。而且申请人前期实验表明，制首乌的醇溶部位的抗氧化IC50值比其他部位低10倍至近1000倍，其反应最灵敏，且检测抗氧化能力的检测器只能和PDA检测器搭建，因此本发明以制首乌的醇溶部位作为检测样品进行质量检测方法。