[发明专利]一种同时测定伊维菌素克洛索隆注射液中两种主药含量的高效液相色谱法

说明书

本发明公开了一种伊维菌素克洛索隆注射液中两种主药含量同时测定的方法，应用于含量测定技术领域。本发明方法属于高效液相色谱法，包括液相色谱条件的筛选、溶液的配制和样品测定。本发明用同一个液相色谱条件即可同时测定伊维菌素和克洛索隆两种主药的含量，降低了原方法分别测定的操作复杂性，提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及一种复方注射液含量测定方法，具体涉及一种同时测定伊维菌素克洛索隆注射液中两种主药含量的高效液相色谱法。

背景技术

伊维菌素克洛索隆注射液为我公司研发的兽用复方制剂驱虫药，主要成分为伊维菌素和克洛索隆，注射液的规格为每1ml含伊维菌素10mg、克洛索隆100mg。其中伊维菌素为大环内酯类抗寄生虫药，克洛索隆为磺胺类驱虫药，其余成分为溶剂、抗氧剂等辅料。由于该品种在中国兽药典、国家其他法定标准中无收载，国外药典例如美国药典中虽有该复方注射液标准的收载，但标准中含量测定的方法采用的是两种方法分别测定，这就需要建立两种不同的色谱条件并分别配制对照品溶液和供试品溶液，操作复杂。

发明内容

本发明提供了一种同时测定伊维菌素克洛索隆注射液中两种主成分含量的高效液相色谱法，该方法的发明简化了原方法中分别测定时溶液的配制和测定的操作复杂性，使得伊维菌素克洛索隆注射液含量的测定更加准确、方便、高效。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种同时测定伊维菌素克洛索隆注射液中两种主药含量的高效液相色谱方法，包括以下步骤：

(A)液相色谱条件的选定

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，0.5％的醋酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，甲醇为流动相C，梯度洗脱；检测波长为254nm；克洛索隆峰与伊维菌素峰分离良好，伊维菌素H₂B_1a峰与伊维菌素H₂B_1b峰分离度大于3.0。

(B)溶液的配制

对照品溶液的配制：取克洛索隆对照品和伊维菌素对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成同时包含克洛索隆和伊维菌素的对照品溶液，每ml对照品溶液中包含0.4mg克洛索隆、0.04mg伊维菌素。

供试品溶液的配制：取伊维菌素克洛索隆注射液适量，加甲醇稀释制成每ml供试品溶液中含0.4mg克洛索隆、0.04mg伊维菌素。

(C)样品的测定

分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度。

本发明的进一步改进在于，梯度洗脱的具体过程为：0-10分钟用流动相A、流动相B组成的混合流动相进行洗脱，10-30分钟用流动相A、B、C组成的混合流动相洗脱，30-40分钟用流动相A、流动相B组成的混合流动相进行洗脱；所述流动相A、B混合流动相中包含体积比65％的流动相A和35％的流动相B，所述流动相A、B、C混合流动相包含体积比7％的流动相A、60％的流动相B和33％的流动相C。

由于采用了上述技术方案，本发明所取得的技术进步在于：

本发明用同一个液相色谱条件即可同时测定伊维菌素与克洛索隆两种主成分的含量，原来的方法需进行四次液相色谱测试和配制四种溶液，现在只需进行两次液相色谱测试和配制两种溶液即可，缩短了液相色谱检测的时间和操作，提高了效率。本发明方法经过方法学系统的验证，准确度高，重现性好，适于在质量控制标准中采用，有利于大面积推广使用。

本发明所述方法中，伊维菌素和克洛索隆的浓度含量与峰面积之间存在良好的线性关系，因此本发明方法中伊维菌素和克洛索隆的含量计算方法可以通过简单的外标法计算得到，计算方法简单。

(一)关于本发明方法的专属性