[发明专利]一种同时测定土霉素氟尼辛注射液中两种主药含量的高效液相色谱法

说明书

本发明公开了一种土霉素氟尼辛注射液中两种主药含量同时测定的方法，应用于含量测定技术领域。本方法属于高效液相色谱法，包括液相色谱条件的筛选、溶液的配制和样品测定。本发明用同一个液相色谱条件即可同时测定土霉素和氟尼辛两种主药的含量，降低了原方法分别测定的操作复杂性，提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及一种复方注射液含量测定方法，具体涉及一种同时测定土霉素氟尼辛注射液中两种主药含量的高效液相色谱法。

背景技术

土霉素氟尼辛注射液为我公司研发的兽用复方制剂，主要成分为土霉素和氟尼辛葡甲胺，注射液的规格为每1ml含土霉素300mg、氟尼辛20mg，其中土霉素为常用的四环素类抗生素，氟尼辛葡甲胺为非甾体类动物专用的解热镇痛药物，属于烟酸类衍生物，是环氧化酶的抑制剂，具有解热、消炎和镇痛作用，氟尼辛葡甲胺可以增强抗生素的活性，两者合用能够明显改善动物临床症状，用于敏感菌引起的各种临床疾病的治疗。虽然2015版《中国兽药典》中收载了土霉素和氟尼辛葡甲胺原料及部分制剂的标准，USP和EP等国外药典也均有收载，但土霉素氟尼辛注射液在国外各药典、中国兽药典、国家其他法定标准中均无收载。因此目前两种主药含量测定的方法采用药典中的方法分别测定，但这种测定方法需要建立两种不同的色谱条件并分别配制对照品溶液和供试品溶液，操作复杂。

发明内容

本发明提供了一种同时测定土霉素氟尼辛注射液中两种主成分含量的高效液相色谱法，该方法的发明简化了原方法中分别测定时溶液的配制和测定的操作复杂性，使得土霉素氟尼辛注射液含量的测定更加准确、方便、高效。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种同时测定土霉素氟尼辛注射液中两种主药含量的高效液相色谱方法，包括以下步骤：

(A)液相色谱条件的选定

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，0.05％的磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；检测波长为254nm；土霉素峰与相邻杂质峰分离良好，氟尼辛峰与土霉素峰分离良好，氟尼辛峰的理论塔板数不低于1500。

(B)溶液的配制

对照品溶液的配制：取土霉素对照品和氟尼辛葡甲胺对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶解并稀释制成同时包含土霉素和氟尼辛的对照品溶液，每ml对照品溶液中包含0.75mg土霉素、0.05mg氟尼辛。

供试品溶液的配制：取土霉素氟尼辛注射液适量，加0.01mol/L的盐酸稀释制成每ml供试品溶液中含0.75mg土霉素、0.05mg氟尼辛。

(C)样品的测定

分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度。

本发明的进一步改进在于，梯度洗脱的具体过程为：0～10分钟用流动相A、流动相B组成的混合流动相进行洗脱，混合流动相中包含体积比80％的流动相A和20％的流动相B；15～30分钟用流动相A、B组成的混合流动相洗脱，混合流动相中包含体积比40％的流动相A和60％的流动相B；31～48分钟用流动相A、B组成的混合流动相进行洗脱，所述混合流动相中包含体积比80％的流动相A和20％的流动相B。

由于采用了上述技术方案，本发明所取得的技术进步在于：

本发明用同一个液相色谱条件即可同时测定土霉素与氟尼辛两种主成分的含量，原来的方法需建立两种色谱条件和配制四种溶液，而且土霉素的液相条件及流动相的配制相当复杂，本方法只需建立一种色谱条件和配制两种溶液即可，缩短了液相色谱检测的时间和操作，提高了效率。本发明方法经过方法学系统的验证，专属性强，准确度高，重现性好，适于在质量控制标准中采用，有利于提高产品的检测效率。