[发明专利]一种艾本那肽前体的制备方法

权利要求书

1.一种艾本那肽前体的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）以氨基树脂为原料，加入脱Fmoc保护剂，脱除树脂上的Fmoc保护基；

（2）经步骤（1）处理后的树脂，通过逐一缩合的方式，按照艾本那肽前体或者其类似物的肽序列依次连接带有保护基的氨基酸，缩合反应中加入缩合试剂和有机碱；

（3）将步骤（2）得到的树脂进行干燥至恒重；

（4）加Mtt保护基脱除试剂至步骤（3）所得树脂中，脱除Lys(Mtt)的侧链Mtt保护基；

（5）经步骤（4）处理后的树脂通过逐一缩合的方式，按照顺序将连接剂连接到Lys的侧链上；缩合反应中加入缩合试剂、有机碱，得到艾本那肽前体或其类似物的树脂肽；

（6）将树脂肽通过裂解液进行处理，除去树脂和保护基，沉淀离心得到艾本那肽前体或其类似物的粗肽；

（7）粗肽经过纯化得到艾本那肽前体或其类似物的精肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氨基树脂为Ramage树脂。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，氨基酸与树脂的投料摩尔比为2∶1～3∶1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）和（5）中，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）和（5）中，缩合温度为10～40℃；所述缩合试剂选自1-羟基苯并三唑一水合物、N,N-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述Mtt保护基脱除试剂与步骤（3）得到的树脂的体积重量比为6～8L∶1kg，优选6.5～7 L∶1 kg；所述Mtt保护基脱除试剂为三氟乙酸、三乙基硅烷和二氯甲烷组成的混合物，其体积比为1∶2∶97。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述连接剂为Fmoc-AEEA-OH和马来酰亚氨基丙酸。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述裂解反应时间为2～5小时，优选为3～4小时；所述裂解液为三氟乙酸、三乙基硅烷、苯甲硫醚和苯酚的混合物，其体积质量比为85 L∶5 L∶5 L∶5 kg。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，所述纯化方法为高效液相反向纯化方法。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，所述高效液相反向纯化方法包括如下步骤：

（a）称取艾本那肽前体粗肽，使用0.1%TFA/H₂O溶解；完全溶解后继续搅拌12～24小时后，过滤，上样；

（b）使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，收集目标组分；

（c）将步骤（b）得到的组分再次上制备柱，使用流动相C和流动相D进行梯度洗脱，收集目标组分；

（d）循环纯化，合并收集到的组分，得到艾本那肽前体或其类似物。