[发明专利]基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒

权利要求书

1.一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，由以下物质组成：

(1)直肠癌细胞药物试剂；

(2)含有通过绿色荧光蛋白标记野生P53蛋白抗体进行表面修饰的磁性纳米颗粒指示液A；

(3)含有通过红色荧光蛋白标记抗变异P53蛋白抗体进行表面修饰的磁性纳米颗粒指示液B；

(4)底物培养基和稀释缓冲液；

所述磁性纳米颗粒指示液A和磁性纳米颗粒指示液B是用于特异性检测待测者的血液在添加直肠癌细胞药物后的野生P53蛋白和变异P53蛋白表达量，并与自体空白组进行对比计算，得到药物敏感性的预测结果。

2.如权利要求1所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述直肠癌细胞药物试剂为含有质量分数为20％直肠癌细胞药物的注射剂。

3.如权利要求1所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述磁性纳米颗粒指示液A的制备方法包括以下步骤：

A1：将磁性纳米颗粒利用戊二醛进行表面活化；

A2：将活化后的磁性纳米颗粒加入到质量比为1.3-1.5倍的野生P53蛋白抗体溶液中，超声负载1-2h；

A3：再加入与所述野生P53蛋白抗体溶液同等体积的绿色荧光蛋白溶液，以及5-10μg/mL的EDC，在pH为7-7.3，温度为2-8℃条件下，反应2-3h，得到经绿色荧光蛋白标记野生P53蛋白抗体进行修饰的磁性纳米颗粒的悬液Ⅰ；

A4：向所述悬液Ⅰ中滴加配制液定容至1-5ml。

4.如权利要求1所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述磁性纳米颗粒指示液B的制备方法包括以下步骤：

B1：将磁性纳米颗粒利用戊二醛进行表面活化；

B2：将活化后的磁性纳米颗粒加入到质量比为1.3-1.5倍的抗变异P53蛋白抗体溶液中，超声负载1-2h；

B3：再加入与所述抗变异P53蛋白抗体溶液同等体积的红色荧光蛋白溶液，以及5-10μg/mL的EDC，在pH为7-7.3，温度为2-8℃条件下，反应2-3h，得到经红色荧光蛋白标记抗变异P53蛋白抗体进行修饰的磁性纳米颗粒的悬液Ⅱ；

B4：向所述悬液Ⅱ中滴加配制液定容至1-5ml。

5.如权利要求3或4所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述配制液按照质量百分比计包括：1-2％聚乙二醇、2-3％BSA、0.1-0.2％维生素E、0.3-0.5％茶多酚，余量为0.9％无菌生理盐水。

6.如权利要求1所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述底物培养基的配方为：以50-100ml无血清DMEM培养基作为底物，终浓度为220-250ng/mL Wnt/β-连环蛋白、终浓度为30-40ng/mL柚皮柑、终浓度为10-30ng/mL丁酸钠、终浓度为0.5-2nM肠促胰液素、终浓度为75-85ng/mL表皮细胞生长因子、终浓度为1-5μM维生素C、终浓度为15-25mM神经酰胺、终浓度为20-25ng/mL成纤维细胞生长因子、终浓度为60-100ng/mL胶原蛋白多肽、终浓度为180-250μg/mL抗菌剂、终浓度为80-120ng/mL游离氨基酸。

7.如权利要求1所述的一种基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒，其特征在于，所述稀释缓冲液的配方为：100-500ml pH6.8磷酸盐缓冲液、0.5-1ml吐温、0.2g过氧化脲素、0.1g醋酸铵。