[发明专利]一种利用土著PAHs降解菌群落去除农田土壤中USEPA PAHs的方法

说明书

本发明公开的是一种利用土著PAHs降解菌群落去除农田土壤中USEPAPAHs的方法。将土壤中土著细菌以PAHs为唯一碳源进行驯化、富集，监测培养液中多环芳烃双加氧酶α亚基(RHDα)基因丰度和细菌群落变化，挑选出合适的细菌群落并扩大培养，然后接种于土壤，即可降低土壤中PAHs含量。所述土著PAHs降解菌群落有较高含量RHDα基因；本发明能够通过提高农田土壤中包括nidA和nahAc在内的RHDα基因丰度，有效去除污染农田中USEPA PAHS，具有高效、环保的优点。

技术领域

本发明涉及环境工程微生物技术领域，具体是涉及一种利用土著PAHs降解菌群落去除农田土壤中USEPA PAHs的方法。

背景技术

多环芳烃(PAHs)是一种环境中广泛存在的一类难降解、高风险有机污染物。现发现已知的PAHs多达几百种，由于其有致癌、致畸、致突变的“三致”效应，且在土壤中具有分布广、隐蔽性大、治理困难等特点。其中16种被美国环保署列为优先控制的PAHs。由于污水灌溉、大气沉降、石化泄露等造成我国及全球土壤PAHs污染日趋严重。根据全国土壤污染调查公报显示，全国土壤中PAHs超标率达到1.4％。

目前常见的土壤中PAHs去除方法，主要通过物理或化学方法将土壤中PAHs固定或分解。但是由于农田土壤的特殊应用，常用的物理或化学方法并不能够适用于修复农田土壤PAHs污染。因此利用微生物修复这一具有低能耗、高效和环境安全的生物技术修复农田土壤具有实际意义。然而，仅以某一种或某几种纯培养的微生物作用于污染土壤，尽管有一定的降解效果，但不仅微生物用量大，而且不利于天然土壤微生物种群的平衡。目前，尚未发现利用驯化、富集土著PAHs降解菌同时去除农田土壤中美国环保署优先控制的多环芳烃(USEPA PAHs)的方法。

发明内容

本发明旨在填补利用土著PAHs降解菌群落同时去除农田土壤中美国环保署优先控制的多环芳烃(USEPA PAHs)的方法技术应用的空白，提供一种利用土著PAHs降解菌群落去除农田土壤中USEPA PAHs的方法。

本发明的技术方案是：

一种利用土著PAHs降解菌群落去除农田土壤中USEPA PAHs的方法，包括以下步骤：

步骤一、土著PAHs降解菌群落的制备：

(1)将土壤悬浊液加入预先配制的含有PAHs的土壤浸出液中，对土壤中的细菌通过以PAHs为唯一碳源进行驯化；

(2)监测驯化过程中参与PAHs降解的细菌RHDα基因的丰度以及细菌群落的变化，驯化过程中nidA和nahAc的含量满足要求的做为一级种子液；

所述nidA引物的正向引物序列和反向引物序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示，

SEQ ID No.1：TTCCCGAGTACGAGGGATAC

SEQ ID No.2：TCACGTTGATGAACGACAAA；

所述nahAc引物的正向引物序列及反向引物序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示，

SEQ ID No.3：ACTTGGTTCCGGAGTTGATG

SEQ ID No.4：CAGGTCAGCATGCTGTTGTT；

所述土著PAHs降解菌群落的组成为：无色菌属(Achromobacter)、类诺卡氏菌属(Nocardioides)、甲基菌属(Methylobacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)、根瘤菌属(Rhizobium)、嗜甲基菌属(Methylophilus)和志贺氏杆菌(Shinella)，该群落拥有广泛的降解谱，其在土壤浸出液中对于10种PAHs都具有良好的降解效率；