[发明专利]一种以去铁蛋白为载体制备紫杉醇纳米药物并回收紫杉醇的方法

说明书

本发明涉及一种制备以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物并回收紫杉醇的方法。紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然广谱、高效的抗肿瘤药，但因其水溶性差、缺乏靶向性限制了其在临床上的应用。去铁蛋白是由24个蛋白亚基自组装形成的中空笼状蛋白，该纳米笼状蛋白可通过蛋白亚基的解聚重组将紫杉醇载入其中形成以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物，该方法可有效提高紫杉醇的水溶性，增加紫杉醇的靶向性，在精准高效治疗癌症等方面具有极大的应用前景。在制备紫杉醇纳米药物时，由于装载率较低，价格昂贵的紫杉醇因无法回收而被浪费。本发明提供了一种在制备紫杉醇纳米药物后回收紫杉醇的方法，可大大降低制备成本，实现紫杉醇的回收再利用。

技术领域

本发明属生物医药技术领域，具体涉及一种以去铁蛋白为载体制备紫杉醇纳米药物并回收紫杉醇的方法。

背景技术

癌症依然是造成人类死亡的重要原因，而化疗是临床治疗癌症最有效的手段之一，使用优秀的化疗药物是化疗成功的关键。紫杉醇是一种广谱、高效的抗癌药物，是目前已发现的最优秀的天然抗肿瘤药物，在临床上已经广泛用于乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌等癌症的治疗。

但是由于紫杉醇水溶性极差，市售紫杉醇注剂主要采用聚氧乙烯蓖麻油与乙醇等体积比混溶增加紫杉醇的水溶性，但聚氧乙烯蓖麻油在人体内会产生严重的毒副作用；且由于紫杉醇缺乏靶向性，该注剂对其它正常细胞、器官、组织也会造成严重的不良影响。去铁蛋白是由24个蛋白亚基自组装形成纳米中空笼状结构，该纳米笼水溶性好、生物相容性强，体内稳定性佳，尺寸均一且理想，且该去铁蛋白本身具有靶向性，可与肿瘤细胞中过量表达的转铁蛋白受体1(TfR1)特异性结合。此外该蛋白可通过调节蛋白亚基的解聚与重组，使紫杉醇载入纳米笼中形成以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物，该紫杉醇纳米药物大大提高了紫杉醇的水溶性，增强了紫杉醇的靶向性，是理想的纳米药物。

但在制备以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物时，紫杉醇的装载率较低，一般为12％-18％，大多数紫杉醇因未被利用而被浪费，造成制备紫杉醇纳米药物的成本增高。因此回收未被利用的紫杉醇是降低成本的关键。

发明内容

本发明的目的是为了提高紫杉醇的水溶性，增加紫杉醇的靶向性，缓解对人体的不良反应，尽可能的降低紫杉醇对正常细胞、器官、组织的毒副作用，而提供的一种以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物，不仅将紫杉醇水溶性提高至100％，而且能与TfR1特异性结合并在TfR1的介导下进入肿瘤细胞，有效的抑制肿瘤细胞的生长、迁移、扩散，可大大提高癌症的治疗效果，实现癌症的靶向治疗、精准治疗。此外在制备紫杉醇纳米药物的过程中，回收未被利用的紫杉醇，大大降低了制备该纳米药物的成本，实现了紫杉醇的回收再利用。

解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)克隆表达去铁蛋白；

(2)分离纯化去铁蛋白；

(3)制备以去铁蛋白为载体的紫杉醇纳米药物并回收未被利用的紫杉醇

优选地，步骤(1)所述的铁蛋白制备方法包括以下步骤：

a.构建去铁蛋白笼表达工程菌：将去铁蛋白编码基因克隆至质粒载体中，并转化至感受态细胞。通过抗生素抗性筛选阳性单克隆转化子，获得表达去铁蛋白的工程菌；

b.表达去铁蛋白：将表达去铁蛋白的工程菌接种至培养基中，待菌液OD600值达到一定值时，加入IPTG诱导表达，离心收集菌体。

优选地，步骤a所述工程菌通过大肠杆菌异源表达去铁蛋白；

优选地，步骤a中质粒载体为pET-20b(+)；

优选地，步骤a中抗生素为氨苄青霉素。

优选地，步骤b所述的OD600值为0.6-0.8；