[发明专利]小反刍兽疫、山羊痘二联灭活疫苗及其生产方法

说明书

本发明涉及一种小反刍兽疫、山羊痘二联灭活疫苗及其制备方法。本发明采用小反刍兽疫病毒PPRV 75/1‑Clone 9株和山羊痘病毒温度敏感弱毒株(CVCC No.AV41)作为疫苗生产毒株分别在Vero细胞和山羊肾细胞培养收获的病毒液经灭活处理后浓缩，两者再混合后加佐剂经乳化制备成有效地预防小反刍兽疫和山羊痘的二联灭活疫苗。该方法采用山羊肾细胞培养山羊痘病毒，改进了生产工艺，克服了用原代细胞制备抗原带来的外源病毒污染、批次不稳定等问题；浓缩及灭活工艺确保的疫苗效力，解决了活疫苗潜在的毒力返强的风险，该产品的研发成功，为规模化厂羊痘及小反刍兽疫的净化提供了物质保障，也为我国小反刍兽疫根除计划的实施提供基础。

技术领域

本发明涉及一种小反刍兽疫、山羊痘二联灭活疫苗及其生产方法。属于兽用生物制品领域。

背景技术

小反刍兽疫和山羊痘是山羊的两种传染性疫病。

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)也称为小反刍兽伪牛瘟、卡他、肺肠炎以及口肺肠炎综合症，是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants,PPRV)引起的小反刍兽一种急性传染病。联合国粮农组织(FAO)和国际兽医局(OIE)都将此病列为A类烈性传染病，在我国该病也被列为一类动物传染病。

1942年，世界上首次在西非的科特迪瓦报道发生小反刍兽疫。随后的几年里，在尼日利亚、塞尔维亚和加纳等非洲国家都报道发生此病。近几年来，小反刍兽疫又有进一步蔓延发展的趋势，并且流行形势日益严峻。到目前为止，中非、东非、西亚以及南亚的许多国家都报道发生过小反刍兽疫。世界各国对此病都予以高度重视，美国、韩国、印度等国家都在积极进行相关方面的研究工作。我国在2007年7月首次在西藏阿里地区报道发生小反刍兽疫，给我国的养羊业造成了重大的损失。

PPRV主要感染山羊和绵羊等小反刍兽，但是不同品种的羊敏感性有显著差别。山羊比绵羊更易感，其中欧洲品系的山羊更为易感。幼龄动物易感性较高，但是哺乳期的动物抵抗力较强。PPR一般多发生在雨季以及干燥寒冷的季节。山羊的发病率可以达到100％，死亡率在20％-90％不等，严重爆发时死亡率也能够达到100％。耐过动物经过一段时间可以恢复健康。

研究表明，山羊在感染PPRV后的四年时仍能够检测到抗体。防制PPR的主要措施就是进行疫苗免疫接种。由于PPRV和牛瘟病毒(Rinderpest virus，RPV)之间的抗原相关性很强，可用RPV组织培养的牛瘟活疫苗对绵羊、山羊进行免疫，并获得了很好的免疫保护效果，但是这种疫苗不利于在全球牛瘟消灭计划的实施，主要在非洲一些少数国家和地区有所使用。目前OIE在发生小反刍兽疫的国家和地区推荐使用的疫苗是PPRV 75/1株的生产的弱毒活疫苗。有研究人员还利用基因反向遗传技术研究成功PPRV/RPV的嵌合体疫苗，即利用PPRV的糖蛋白基因取代RPV表面的相应糖蛋白基因。利用这种方法构建的疫苗，对PPRV能够产生良好的免疫原性。此外，G.Berhe等将小反刍兽疫的F基因克隆到山羊痘病毒中构建了基因重组疫苗，能够抵抗小反刍兽疫强毒的感染，但是还没有应用到临床生产实践中。

小反刍兽疫活疫苗是由1975年从尼日利亚分离到的PPRV 75/1株病毒接种Vero细胞并连续传代达70代以后致弱获得的疫苗毒株。目前OIE参考实验室已经传代至120代，病毒仍然保持一定的免疫保护力。毒株在细胞上繁殖以后以冻干的形式－20℃条件下保存。

山羊痘(Goat pox)是由山羊痘病毒(Goat pox virus)引起的山羊的一种高度接触性传染病。临床特征与绵羊痘相似。主要表现为皮肤和粘膜上出现疱疹，进而形成痘肿，并渐进发展为化脓，结痂和引起全身痘及全身性反应。但临床上也有痘肿不经化脓过程的，即所谓“石痘”。重症患羊多出现内脏器官病变和死亡。本病在地中海地区，非洲、和亚洲的一些国家，以及中、近东一带均有发生。也偶见欧洲部分地区和澳大利亚。呈散发或地方性流行。其病状和死亡率，因毒株及宿主不同而有差异。有报告称土耳其的死亡率为3％～40％(Chefik)；摩洛哥的死亡率为5％～70％(Grimpret)等。