[发明专利]一种提取核酸的方法、提取介质、试剂盒

说明书

本发明提供一种提取核酸的方法，将针对目标核酸特异性的抗体与特定材料进行偶联，获得核酸提取材料；将待提取样品加入所述核酸提取材料，核酸提取材料与核酸进行特异性结合，进而进行核酸提取，获得核酸‑核酸提取材料复合物；用洗涤液洗涤，得到除去杂质的核酸‑核酸提取材料复合物；进行洗脱，获得目标核酸分子。本发明还提供了一种核酸提取介质，所述核酸提取介质包括由针对目标核酸的抗体和提取材料偶联所得的核酸提取材料。本发明还提供了一种提取核酸的试剂盒。本发明针对现有技术对小片段核酸提取回收率低的缺陷，利用免疫抗体特异性、专一性的捕获的特性，将针对目标核酸的抗体偶联到特定材料上，再对核酸进行提取和纯化，提高了核酸提取的回收率和效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及一种提取核酸的方法、提取介质、试剂盒。

背景技术

1948年，Mandel和Metais首次报道了人类血液中游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)的存在。cfDNA是一种无细胞状态的、片段化的胞外DNA，主要存在于血液、骨膜液和脑脊液等体液中。大量研究发现，cfDNA含量增高对肿瘤早起诊断、无创产前诊断、疗效检测和预后判断等方面具有很高的临床价值。除此之外，cfDNA在器官移植、脑卒中、自身免疫病和心肌梗死等疾病上的应用价值也日益清晰。cfDNA在血浆内的含量极低，大致范围在15-40ng/ml。

肿瘤患者cfDNA中存在循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA)。ctDNA上具有体细胞突变、DNA甲基化、拷贝数变异等肿瘤特异性基因改变信息，因此ctDNA可作为肿瘤诊断、检测、预后及指导临床个体化给药的工具。

cfDNA含量少且高度片段化，大部分cfDNA片段长度在166bp左右，其中大部分来源于正常组织，只有极少量是肿瘤来源的ctDNA。肿瘤来源的ctDNA比正常组织来源的cfDNA更短。＜150bp的cfDNA越多，其中含有的ctDNA比例越高。因此，获得更多片段cfDNA进行下游分析可有效提高ctDNA的检测灵敏度。

cfDNA的检测分为定量检测cfDNA浓度、定性检测ctDNA中基因突变和检测cfDNA完整性指数。为了获得可靠的检测结果，首先要有高质量的cfDNA模板，而cfDNA高度片段化的特点导致其在提取过程中已丢失，提取难度大，给临床应用cfDNA进行疾病诊断等工作造成困难。因此，提取到浓度高、短片段更多的cfDNA对于临床cfDNA下游检测至关重要。

目前，很多商品化试剂盒可用于cfDNA提取，主要分为磁珠法和硅胶膜离心柱法，从原理上来说都是依靠二氧化硅材料表面的硅羟基与cfDNA之间的非特异性结合而实现的。市场上最主要的产品为Qiagen公司的QIAamp游离核酸提取试剂盒(Qiagen CAN kit)。

相关研究表明，对于长度为75bp和91bp的短核酸片段，目前市场上的试剂盒提取回收率较高的为31.8％-33.7％；对于长度为157bp的核酸片段，目前市场上的试剂盒提取回收率为40％左右；对于长度为195bp和303bp的中长核酸片段，目前市场上的试剂盒提取回收率较高的为75.5％-77.6％；对于长度为398bp的核酸长片段，目前市场上的试剂盒提取回收率为76.0％-87.4％。

虽然目前核酸提取技术比较成熟，但是对于一些要求比较严格，如单细胞基因组测序(分离的单个细胞的微量全基因组DNA)，或者本身DNA存在量就较少,如胎儿外周血游离DNA。目前的方法针对这些应用领域的核酸提取就有一些限制和不足。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种核酸提取方法，采用免疫抗体特异性、专一性的捕获方法来提取核酸，可以提高对核酸的提取回收率，尤其是对于小片段的核酸，能够高效率并精准的捕获到相应核酸，达到将核酸从复杂的体液样本环境中提取和纯化的目的。

本发明提供的一种核酸提取方法，包括如下步骤：