[发明专利]一种基于丝网印刷电极的禽流感病毒电化学传感器在审
| 申请号： | 201910418115.5 | 申请日： | 2019-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN110261453A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 陈俊华;高金娥 | 申请（专利权）人： | 武汉中科志康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/327 | 分类号： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市洪山区东湖高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丝网印刷电极 禽流感病毒 电化学传感器 工作电极 血凝素 绝缘层 电化学免疫传感器 兔多克隆抗体 印刷基板表面 标记葡萄糖 单克隆抗体 病毒检测 参比电极 生物传感 丝网印刷 碳纳米球 载体固定 对电极 纳米金 氧化酶 传感器 导轨 构建 修饰 灵敏 印刷 制作 | ||
1.一种基于丝网印刷电极的禽流感病毒电化学传感器，其特征在于，其步骤如下：
（1）将丝网印刷电极在氯金酸溶液中进行循环伏安扫描，得到纳米金修饰的丝网印刷电极Au/SPE，将所述Au/SPE放入巯基乙胺溶液中，4℃放置过夜进行巯基自组装；将巯基自组装后所得电极在含有戊二醛的磷酸缓冲液（PH7.2）中浸泡2h，超纯水洗涤，氮气吹干后，将5μL HRP溶液（1mg/mL，0.1MTris-HCl缓冲液）滴加到Au/SPE电极表面，置于37℃恒温箱中孵育30min，PBS冲洗后，得到HRP/Au/SPE电极，4℃保存备用；
所述丝网印刷电极的工作电极和对电极为碳电极，参比电极为银/氯化银电极；
（2）取5μL抗H9N2禽流感病毒血凝素的兔多克隆抗体（Ab1）溶液(80ng/mL，0.1 mol/LPBS，pH7.0)滴加至HRP/Au/SPE电极表面晾干，用戊二醛进行交联，再用磷酸缓冲溶液冲洗，晾干，得到Ab1/HRP/Au/SPE修饰电极；将所述Ab1/HRP/Au/SPE修饰电极浸入BSA溶液中反应30 min，取出，用磷酸缓冲液冲洗，晾干，得到禽流感病毒电化学免疫传感器(BSA/Ab1/HRP/Au/SPE)，将所述电化学免疫传感器置于4℃冰箱中保存备用。
2.一种基于丝网印刷电极的禽流感病毒电化学传感器的信号放大及检测，其特征在于，其步骤如下：
将BSA/Ab1/HRP/Au/SPE免疫传感器浸入H9N2禽流感病毒溶液（40ng/mL，0.1 mol/LPBS，pH7.0）中孵育20 min，用磷酸缓冲溶液冲洗，晾干，滴加5 μL碳纳米球标记葡萄糖氧化酶标抗H9N2禽流感病毒血凝素的单克隆抗体溶液（CNS-GOD-Ab2），免疫结合1h，用磷酸缓冲溶液冲洗后，晾干；在-0.4 ~ 0.4 V电位范围内，进行差分脉冲伏安法测定，测试底液为20μM HQ和18mM葡萄糖的PBS溶液(0.1M，pH7.0)；
所述碳纳米球标记葡萄糖氧化酶标抗H9N2禽流感病毒血凝素的单克隆抗体溶液（CNS-GOD-Ab2）的制备方法为：0.5 mL羧基化碳纳米球（CNS）溶液和0.8 mL的葡萄糖氧化酶标抗H9N2禽流感病毒血凝素的单克隆抗体溶液GOD-Ab2混合，室温搅拌过夜，加入BSA溶液室温搅拌，用磷酸缓冲溶液进行冲洗，分离，得CNS-GOD-Ab2。
3.一种基于丝网印刷电极的禽流感病毒电化学传感器，其特征在于，它是用来检测H9N2禽流感病毒的。
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