[发明专利]一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及其应用

说明书

本发明涉及一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及其应用。本发明中的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，是通过将PSMD11基因的第5外显子敲除，从而实现失活整个基因，首次获得了PSMD11基因条件性敲除小鼠模型。PSMD11在调节蛋白酶体组装及活性方面都起到非常关键的作用，而且PSMD11蛋白还被证明能够抑制胰腺癌细胞急性凋亡，本发明构建得到的PSMD11基因条件性敲除小鼠模型为进一步研究PSMD11基因的生物学功能奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及其应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

条件性基因敲除小鼠模型是近年来在生命科学研究领域发展起来的一项新技术，它是在胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES)技术和同源重组技术的基础上发展起来的，通过利用Cre-loxP重组系统，可以实现条件性基因敲除，是开展基因功能研究的重要工具。

PSMD11是26S蛋白酶体复合物的成分之一，该复合体负责进行ATP依赖的泛素化蛋白降解。蛋白酶体通过消除错误折叠的、受损的蛋白或者某些功能已经不再被需要的蛋白，在维持蛋白动态平衡方面发挥重要作用。因此，蛋白酶体参与细胞周期进展，细胞凋亡或者DNA损伤修复等多个过程。26S蛋白酶体包括一个20S的核心微粒(CP)，和两个19S的调控亚基(RP)。调控亚基是由一个由9个亚基(包括PSMD11蛋白)组成的盖子以及6个ATP酶和少量的附加成分组成的基底组成的。在蛋白酶体中，PSMD11在调节蛋白酶体组装及活性方面都起到非常关键的作用，它的高表达或磷酸化都可以促进26S蛋白酶体的组装及活性。另外PSMD11蛋白还被证明能够抑制胰腺癌细胞急性凋亡，提示该蛋白具有多种生物学功能。为了进一步探讨PSMD11蛋白的生物学功能，目前急需建立一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型，目前有关小鼠PSMD11基因的敲除还未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及其应用，进一步探讨PSMD11的生物学功能。

本发明的技术方案如下：

一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，所述小鼠模型为PSMD11基因杂合敲除的小鼠，其特征在于，包括步骤如下：

构建PSMD11基因条件性敲除的重组载体；线性化上述重组载体并转染胚胎干细胞；筛选发生同源重组的胚胎干细胞克隆；将上述筛选出的胚胎干细胞克隆显微注入C57BL/6供体小鼠的囊胚；将含有胚胎干细胞克隆的囊胚移植到假孕小鼠的子宫，生产出嵌合体小鼠；将上述嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠回交生出杂合子小鼠；将上述杂合子小鼠与全身性表达Cre酶的小鼠交配，获得PSMD11基因条件性敲除小鼠模型。

根据本发明优选的，所述PSMD11基因条件性敲除的重组载体的构建方法，步骤如下：

(1)提取含有PSMD11基因的细菌人工染色体；

(2)以步骤(1)提取到的细菌人工染色体为模板，PCR扩增三段同源重组片段，分别为长臂、短臂、及条件性敲除区，PCR的引物序列分别为：

长臂的PCR引物为LA-F：5’-GGACTAGTCAATGGCTCACCACTGTCAG-3’和LA-R：5’-CGGGATCCGAGGAGAGGGAAGAGGGAGG-3’，

短臂的PCR引物为SA-F：5’-ACGCGTCGACAGGAACGTGAGTTACAGACG-3’和SA-R：5’-GGAATTCCAGGAGAGCTACACAGAGAAA-3’，