[发明专利]一种中药材中黄曲霉毒素样品净化萃取检测方法及其净化移液枪

说明书

本发明提供了一种中药材中黄曲霉毒素样品净化萃取检测方法及其净化移液枪，属于化学分析检测技术领域，检测步骤包括：样品提取，样品净化，样品排液；将移液技术与样品净化技术相结合，可以实现在液体移取的同时，完成待测样品的净化过程，大大节省了操作步骤，保证了检测精度。

技术领域

本发明属于化学分析检测技术领域，具体涉及一种中药材中黄曲霉毒素样品净化萃取检测方法及其净化移液枪。

背景技术

黄曲霉毒素是一种香豆素类衍生物，由黄曲霉菌代谢产生，是剧毒的一类致癌物。黄曲霉菌多存在于湿热环境下发霉的粮食或木材当中。因此这些药材如若采用被黄曲霉菌污染的原料，药材产品中也有很大可能含有黄曲霉毒素，从而影响消费者健康。

中药材尤其是植物类中药材，从原料的人工种植或野外采摘，到干燥炮制而最终入药，需要经历漫长的存储加工过程。为了保证所得中药的道地，以及药效成分的纯正，往往不在中药材中添加任何防腐成分。因此，常常因加工存储不当或流转时间过长而发生药材霉变。

中成药制备前序工艺非常重要的一步就是毒性成分分析，分析前需要对干扰的药材物质进行净化萃取处理。常用的药材净化方法多采用净水清洗、水泡以及蒸煮灭菌等方式，再采用对应有机溶剂固相萃取。

然而，①上述方法需要专门的药材处理设备，成本高，不利于快速检测及野外采集检测的环境。②在净化过程中，样品仅靠重力与硅胶吸附作用慢慢流经固相柱，耗时过长且操作不便，并且植物类材料颗粒容易堵塞柱体，影响净化产率。③样品在净化后需要额外步骤转移到检测设备当中进行检测。其难以避免与外界环境发生接触，容易引起二次污染，影响检测的精度。移液枪是分析检测过程必备的液体移取工具，移液精度高，广泛应用于药材、环境、生物检测领域。

发明内容

为了提高检测工作效率，提高检测精度，本发明提供一种中药材中黄曲霉毒素样品净化萃取检测方法，将移液技术、样品净化技术以及固相分离萃取技术相结合，可以实现在液体移取的同时，完成待测样品的净化萃取过程，大大节省了操作步骤，保证了检测精度。

本发明提供一种中药材中黄曲霉毒素样品净化萃取检测方法，检测步骤包括：(1)样品提取：取待检样品用提取溶剂定容，振荡提取，收集上清液为样品提取液；(2)样品净化：采用移液枪定量吸取样品提取液，使提取液流经/流过净化材料，继续定量吸取空气，鼓动样品提取液内气泡，使移液枪头内净化材料吸附杂质；(3)样品排液：将净化后的样品排出，送至检测设备上机检测；

其中，在步骤(2)中，样品净化步骤包括：①取出枪头，安装于移液枪，将枪头伸入待净化样品液面以下，按下移液枪，使移液枪在枪头内产生负压吸液，吸入1ml待净化样品，使净化样品流经/流过净化样品，停留5s；②将移液枪枪头移出液面，再次按下移液枪，使移液枪内枪头内产生负压吸液，吸入1ml空气，鼓动样品提取液内气泡，使液体与净化材料充分混合，重复此步骤三次，共吸入4ml空气；③移液枪显示5000ul ALL满载，将枪头对准2ml样品瓶，按下移液枪排液，收集净化液上机分析。

其中，在步骤(1)中，提取步骤包括：称取5g中药材样品粉碎，过1mm分样筛，于50mL离心管中，用提取液(95wt％乙腈/水)分散定容到20mL，涡旋混匀；超声提取30min，放入离心机(8000r/min离心20min)，取上清液作为样品提取液。所述中药材优选为植物类中药材，包括决明子、莲子和茯苓。

其中，在步骤(3)中，通过高效液相色谱(HPLC)进行分析，检测条件为：

流动相：A相，水；B相，乙腈-甲醇(50:50，v:v)；

等梯度洗脱条件：A，68％；B，32％；

色谱柱：C18柱(柱长250mm，柱内径4.6mm，填料粒径5μm)；

流速：1.0mL/min；

柱温：40℃；