[发明专利]一种渔用浸泡免疫复合佐剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种低毒、高效、速效、长效的渔用浸泡免疫复合佐剂及其制备方法与应用，涉及水产养殖。所述渔用浸泡免疫复合佐剂，由以下质量百分比组分制成：RH‑40 25～35％、无水乙醇10～20％、黄芪多糖10～15％、蜂胶5～8％、乙酸乙酯3～6％、抗坏血酸钠1～3％、氯化钠1～2％和蒸馏水11～55％。

技术领域

本发明涉及水产养殖，尤其是一种渔用浸泡免疫复合佐剂及其制备方法与应用。

背景技术

无污染的渔用疫苗因其可安全、有效地预防水产养殖动物疫病，已成为国际上水产疫病防控的主流技术，渔用疫苗的研发向着“高效、实用、低价、多样”方向发展，浸泡口服、多联多价、区域差异化免疫方案等实用性技术将应用到生产管理。其中浸泡免疫操作简单、可短时间内实现批量注射、对鱼体刺激小，对鱼种鱼苗接种效果更佳，且浸泡免疫具有激发鱼体黏膜免疫应答的潜力，对于防御由黏膜组织进入鱼体的病原有重要意义，推广价值高。目前水产养殖生产上应用的疫苗大多为灭活疫苗，接种后不能在动物体内繁殖，接种剂量大，保护周期短。而浸泡免疫过程中疫苗用量大，而鱼体获得的免疫力却相对较弱，免疫成本高，严重制约了浸泡免疫的生产推广应用。因此在不断构建新的鱼用疫苗基础上，研究如何提高浸泡免疫效果的意义重大。

鱼用疫苗免疫效果的优劣与佐剂的选择、使用方法存在较大的关系。浸泡免疫在小规格、大批量处理方面具有明显的优越性，通过佐剂和新操作技术的使用可以显著提高疫苗的免疫保护率，因此佐剂与疫苗使用的研究与开发已成为鱼类免疫学领域的热点，随着新材料新技术的应用，越来越多的佐剂和技术将进入浸泡免疫，提高浸泡免疫效果。但目前来看，浸泡免疫中抗原递呈，特别是对抗原的大小、性质、敏感与耐受等方面还缺乏科学性系统性的数据支撑，因此，对浸泡佐剂和操作技术的筛选缺乏切实的针对性，制约了产业发展。通过多来源、多途径的方式开发低毒、高效、速效、长效的鱼用免疫佐剂，和安全、快捷、易操作的疫苗使用技术已成为鱼病防治，特别是重大疫病防控研究的发展趋势。

发明内容

本发明的目的之一为提供一种低毒、高效、速效、长效的渔用浸泡免疫复合佐剂。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种渔用浸泡免疫复合佐剂，由以下质量百分比组分制成：RH-40 25～35％、无水乙醇10～20％、黄芪多糖10～15％、蜂胶5～8％、乙酸乙酯3～6％、抗坏血酸钠1～3％、氯化钠1～2％和蒸馏水11～55％。

优选地，所述渔用浸泡免疫复合佐剂由以下质量百分比组分制成：RH-40 30％、无水乙醇15％、黄芪多糖12％、蜂胶6％、乙酸乙酯5％、抗坏血酸钠2.5％、氯化钠1.5％和蒸馏水25.5％。

本发明的目的之二在于提供上述渔用浸泡免疫复合佐剂的制备方法。

为实现上述目的，本发明的提供的技术方案是：将蜂胶完全溶于无水乙醇中，并加入RH-40和乙酸乙酯，混匀后逐滴加入含量为37.5％(质量比)黄芪多糖水溶液，抗坏血酸和氯化钠，即得均匀透明的免疫复合佐剂。

本发明的目的之三在于提供上述渔用浸泡免疫复合佐剂的应用。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：将免疫组在1.5％盐水中充气浸泡5min后，将免疫复合佐剂与疫苗按体积比1:1～2混合，置于水中按等量混合后的体积1.5-2％的浓度使用，浓度和剂量随鱼体规格变大而增加，见表1。

表1疫苗使用浓度与鱼体规格对应表

在批量免疫过程中要密切观察安全免疫测定鱼的稳定状态，如出现异常，应及时对对应的批量受免鱼在密度、水质等方面采取早期安全防护处理。通常选择在天气晴朗，水温适宜的上午8-10点，下午4-6点进行。鱼种吊养2—3小时后再开始浸泡操作。