[发明专利]一种链球菌基因诱导表达系统及其应用

权利要求书

1.一种链球菌基因诱导表达系统，其特征在于：所述系统包括基因xylR和人工设计的启动子O2p；

所述基因xylR的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，所述人工设计的启动子O2p的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示，所述诱导表达系统的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示；

所述xylR基因由启动子xylAp和强核糖体结合位点RBSs驱动表达，所述启动子O2p包含两个操纵子位点；

所述启动子xylAp的核苷酸序列为SEQ ID No.3所示，所述强核糖体结合位点RBSs的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示。

2.根据权利要求1所述的链球菌基因诱导表达系统，其特征在于：所述基因表达系统在不添加木糖的培养基中背景表达极低，而在添加木糖的培养基中能够实现基因的高强度表达。

3.一种如权利要求1所述的链球菌基因诱导表达系统在细菌转座子突变库构建中的应用。

4.根据权利要求3所述的链球菌基因诱导表达系统在细菌转座子突变库构建中的应用，其特征在于：所述应用是将基因诱导表达系统与转座酶基因和红霉素抗性基因盒连接入温度敏感质粒pSET4S构建重组质粒，所述重组质粒导入宿主菌，在30℃、木糖诱导培养条件下实现转座，之后培养液在40℃，红霉素抗性条件下筛选，获得转座子突变库。

5.根据权利要求4所述的链球菌基因诱导表达系统在细菌转座子突变库构建中的应用，其特征在于：所述转座酶基因为Himar1-C9，其核苷酸序列为SEQ ID No.6所示，所述红霉素抗性基因盒由红霉素抗性基因及两侧的反向重复序列ITR组成，即ITR-erm-ITR，其核苷酸序列为SEQ ID No.7所示。

6. 根据权利要求4所述的链球菌基因诱导表达系统在细菌转座子突变库构建中的应用，其特征在于：所述重组质粒为重组质粒pTN01，其核苷酸序列为SEQ ID No.8。

7.根据权利要求4至6任一项所述的链球菌基因诱导表达系统在细菌转座子突变库构建中的应用，其特征在于：所述木糖诱导培养是在30℃，培养基中加入质量终浓度为0.8%的木糖；所述红霉素抗性条件下筛选是在40℃，包含12.5ug/ml 红霉素的固体培养基上培养。