[发明专利]一种精准获得全基因组范围内结构变异的方法

权利要求书

1.一种精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，将待测基因组片断化后，切胶回收不同片段大小的目的片段，再通过高通量测序分别建库测序，基于大小不同的片段测序结果，通过对不同片段之间重叠分析，进一步鉴定基因组内的结构变异情况。

2.根据权利要求1所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，所述基因组片段化步骤之前包括基因组DNA的提取，利用酚-氯仿提取待测样品基因组。

3.根据权利要求2所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，提取的待测样品基因组经过琼脂糖电泳检测提取基因组DNA的完整性，通过Thermo ScientificNanoDrop 2000/2000c进行纯度检测，并用进行定量。

4.根据权利要求3所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，所述将待测基因组片断化后，切胶回收不同片段大小的目的片段步骤具体为：对提取的基因组利用超声打断和酶打断，使其片段分布于200～700bp，之后通过琼脂糖凝胶电泳系统分别回收200bp、300bp和500bp大小的片段。

5.根据权利要求4所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，利用Agilent Bioanalyzer 2100来检测基因组DNA的片段化分布，琼脂糖凝胶电泳系统采用Life technology公司开发的E-预制琼脂糖凝胶电泳系统。

6.根据权利要求4所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，所述通过高通量测序分别建库测序步骤具体为：

1)将回收的不同大小DNA片段末段补平和加腺嘌呤尾巴，将处理后DNA片段的两端加上测序时需要的DNA接头序列；

2)将步骤1)处理后产物纯化后进行PCR扩增；

3)扩增文库的检测及其目标片段320bp、420bp和620bp的回收；

4)对所选择DNA文库的测序。

7.根据权利要求6所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，步骤1)DNA片段末段补平和加腺嘌呤尾巴以及DNA接头序列的连接均通过KAPA Hyper Prep Kit进行完成。

8.根据权利要求6所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，步骤2)产物的纯化是通过Backman AMPure XP Beads或离心柱型DNA纯化回收试剂盒完成。

9.根据权利要求6所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，步骤2)PCR扩增按以下反应条件进行：98℃45s；98℃10s，60℃30s，72℃30s，7-10循化；72℃1min；4℃保存。

10.根据权利要求6所述的精准获得全基因组范围内结构变异的方法，其特征在于，步骤3)中扩增文库通过E-预制琼脂糖凝胶电泳系统检测。