[发明专利]一种新孢子虫NcMIC26抗原及其应用

说明书

本发明公开了一种新孢子虫NcMIC26抗原及其应用。本发明首先公开了一种新孢子虫NcMIC26抗原，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明进一步公开了上述抗原的重组蛋白在构建新孢子虫间接ELISA诊断试剂盒中应用。本发明通过筛选得到了一种新的适用于新孢子虫病的诊断抗原，利用其重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA试剂盒，操作简单、快速高效，特异性好、敏感性高，重复性好，可用于检测牛群新孢子虫感染情况，能检测到常用的NcSRS2蛋白检测不到的阳性样本，可获得更准确的检测数据，对于新孢子虫病的防治具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域，特别是关于一种新孢子虫NcMIC26抗原及其应用。

背景技术

新孢子虫病(neosporosis)是由新孢子虫(Neospora caninum)引起的能感染多种动物的原虫病，新孢子虫引发的疾病有全球性分布趋势。该病对牛和犬的危害最为严重，是引起牛流产、产弱胎、死胎、木乃伊胎和犬的神经系统障碍性疾病的主要原因之一，给畜牧业带来严重的经济损失。不同国家和地区所报道的牛新孢子虫病的感染强度存在一定差异，血清抗体阳性率为13.5％～82％。目前，对新孢子虫还没有任何有效的药物和疫苗。

新孢子虫病的主要检测方法有病原学诊断、组织病理学诊断、分子生物学诊断以及血清学诊断等。由于新孢子虫为专性细胞内寄生原虫，病原学及病理学诊断较为困难，而血清学诊断方法能应用于动物活体检测，可以在流行病学调查过程中提供动物感染阶段的信息，并且其感染新孢子虫后抗体水平的高低，可能提供关于动物患有新孢子虫病、反刍动物流产以及经胎盘传播新孢子虫风险的信息等优点，已成为流行病学调查研究的重要手段。最早应用于检测新孢子虫抗体的血清学技术是间接免疫荧光试验(IFAT)，也是目前新孢子虫血清学检测方法的“金标准”。但是该实验需要的试剂(如特异性荧光标记抗体的质量)和仪器(如荧光显微镜)及操作步骤较为复杂，对实验操作人员的要求较高，对结果临界值的判定有一定的困难，因此不适用于临床上田间大批量筛查实验。随着大规模流行病学研究的开展，ELISA检测方法由于其简单、快速、高效，结果的判定不受主观因素的影响等优点而被广泛应用，逐渐成为血清学检测的主要方法。

早期间接ELISA以速殖子、裂解的新孢子虫抗原以及免疫刺激复合物(ISCOM)诊断抗原进行检测，在新孢子虫诊断过程中显示良好的诊断参数，但由于新孢子虫与同属于顶复亚门原虫的弓形虫亲缘关系相近，容易出现交叉反应而导致特异性不高，且该抗原制备成本较高。随着重组蛋白表达及纯化技术的发展，应用高纯度重组蛋白代替天然抗原作为检测抗原的诊断技术弥补了上述缺点。目前公认的也是应用最广泛的新孢子虫诊断抗原为NcSRS2，在血清学检测中显示良好的特异性和敏感性。但由于牛感染新孢子虫的不同时期以及抗体水平在感染牛体内存在一定的波动性。在一些研究中发现，新孢子虫阳性胎儿的母牛血清学呈阴性，造成这种现象的原因可能是由于母牛体内抗体水平的波动所造成，或者是由于检测方法的敏感性不高形成的假阴性。已报道的检测抗原在对牛群的新孢子虫病的实际诊断过程中仍存在局限性，对流行病学调查的结果造成一定误差。

因此，迫切需要筛选新的诊断效果更好的优势抗原，建立更加敏感、特异的血清学诊断方法，能应用于动物群体检测，为新孢子虫病的诊断提供依据。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种新的新孢子虫优势抗原，该抗原对检测新孢子虫具有高的敏感性和好的特异性。

本发明的另一目的在于提供包括上述抗原的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA试剂盒，建立简单、快速、高效的血清学诊断方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种新孢子虫NcMIC26抗原，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。