[发明专利]早熟禾半潜隐病毒作为VIGS载体的应用

权利要求书

1.基于早熟禾半潜病毒的基因沉默载体系统在对谷子进行基因沉默中的应用；

其中，所述基于早熟禾半潜病毒的基因沉默载体系统包括含有早熟禾半潜病毒(Poasemilatent virus)RNAα、RNAβ和RNAγ表达盒的质粒；

其中，RNAα、RNAβ和RNAγ分别位于不同的表达盒中，这些表达盒位于同一质粒或位于不同质粒上；

所述RNAγ表达盒中还含有靶标序列，所述靶标序列位于RNAγ中γb蛋白编码基因的3`端；

RNAα、RNAβ和RNAγ的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3-5所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表达盒由T7启动子驱动表达。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述质粒的出发载体选自pBluescript IISK(+)、pMD19-T。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，利用所述基因沉默载体系统对谷子PDS基因进行基因沉默。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因沉默载体系统包括：

(1)含有RNAα的pBluescript II SK(+)质粒；

(2)含有RNA β的pMD19-T质粒；以及

(3)含有RNAγ且在γb蛋白编码基因3`端整合有谷子PDS基因靶标序列的pBluescriptII SK(+)质粒；

其中，用于扩增谷子PDS基因靶标序列的PCR引物为：

F10：5′-ctctgactgcagaggTCAATGTTCATATATGGTTTG-3′；

R10：5′-agtactcatatgaggGCAGCGATTTCATCTGGAAAC-3′。