[发明专利]一种惰性载体大肠杆菌及其潜在应用

说明书

本发明涉及一种惰性载体大肠杆菌及其潜在应用，基于该大肠杆菌分离株具备惰性载体特性，有望开发成一种用于间接凝集试验的载体菌。所述惰性载体大肠杆菌已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC)，保藏地址为中国北京，保藏编号为CGMCC No.17339，保藏日期为2019年3月18日，分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli），菌株代号SE1。该大肠杆菌分离株来自健康鸡群，在较高的工作浓度下的细菌数量与不同遗传背景的多种鸡源血清不发生任何肉眼可见的凝集反应，即与鸡源血清不产生非特异性凝集反应，我们称该大肠杆菌为惰性载体大肠杆菌。本发明为开发简便快速间接凝集检测方法提供了一种惰性载体菌和其潜在应用。

发明领域

本发明隶属生物技术检测领域，涉及一种惰性载体大肠杆菌、分离鉴定及其应用，鉴于这种载体大肠杆菌在工作浓度下的细菌数量与鸡源血清不发生非特异性凝集反应的特性，以及其在简便快速检测抗原或感染抗体的间接凝集试验检测方法的开发中提供一种惰性载体和具有潜在应用前景。

背景技术

免疫学的发展为临床上简便快速检测病原菌提供了许多技术方法，其中凝集试验是目前医学、兽医临床使用较为广泛的一种传统、经典的疫病快速诊断方法，其原理是细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应的抗体结合后，当有电解质存在时，抗原颗粒出现相互凝集凝聚现象，形成肉眼可见的凝集小块或颗粒。参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。平板凝集试验是凝集反应中较为常用的一种定性方法，将含有已知抗体的诊断血清(适当稀释)与待检菌悬液各滴一滴于洁净的透明玻璃平板上，等体积轻轻混合后，室温等待2分钟内，如出现肉眼可见的颗粒状凝集，即为阳性反应，常用于细菌的鉴定和血清型的分型等。相反，也可用已知的诊断抗原检测待检血清或全血中是否存在相应抗体，常用于布氏杆菌的玻板凝集反应和鸡白痢/禽伤寒沙门氏菌全血平板凝集试验等。值得注意的是，以乳胶颗粒等惰性载体，在直接凝集反应的基础上发展起来的间接凝集反应扩大了检测应用范围和增加了反应的敏感性。

凝集试验适用于病原感染的快速诊断，具有简便快捷、不需要额外昂贵仪器、成本低廉且可现场测试等众多优点，但是在实际应用中也出现了一些弊端和技术瓶颈，如以检测鸡白痢/禽伤寒沙门氏菌感染的全血平板凝集抗原为例，该凝集抗原检测在实践应用中有一定的局限性，被报道存在多种交叉反应明显，各批次检测结果不一致，弱阳性漏检等多种影响检测结果的因素，且该法仅对成年鸡群检测效果相对敏感，对雏鸡则可能存在较大检测误差。前期研究中，专利申请发明人所在实验室使用目前临床应用最广泛的商品化鸡白痢/禽伤寒沙门氏菌染色凝集抗原，分两次在不同时间检测同一批来自某鸡场200份血清时发现，检测结果总符合率仅为81％。与荷兰Biochek公司的沙门氏菌D群ELISA试剂盒对比检测结果时发现，检测结果总符合率仅为79.5％，阳性符合率(检出率或敏感性) 为75.2-79.4％，阴性符合率为79.5-85.5％。上述检测结果和比较分析表明该商品化凝集抗原检测鸡白痢/禽伤寒沙门氏菌血清抗体时，敏感性、特异性和结果准确性均未达到较为理想的水平，且每批次检测结果并不稳定和一致。在应用来自同一种鸡场分离的鸡白痢沙门氏菌制备的自家凝集抗原对比检测相同的200 份血清时发现，检测结果与沙门氏菌D群ELISA试剂盒的符合率从79.5％上升到 88％，其中阳性符合率(检出率或敏感性)也提升到了97.5％，这一结果也证明了目前商品化凝集抗原的检测结果存在一定程度或较为明显的假阳性错检和假阴性漏检。