[发明专利]一种引物组合物及其应用

说明书

本发明提供了一种引物组合物及其应用，所述引物组合物包括上游引物、下游引物和测序引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；通过选取SLC30A8基因启动子特定区域的6个CpG位点，亚硫酸氢盐处理基因组DNA，以处理后的产物为模板，对SLC30A8基因启动子特定区域进行扩增并采用焦磷酸测序检测该6个位点的甲基化比例，优化实验条件参数，各步骤各条件相互配合，准确定性检测位点变化情况和频率变化，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种引物组合物及其应用。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种遗传与环境因素综合作用导致的慢性代谢性疾病，主要是由于胰岛素分泌不足及功能障碍导致的机体糖代谢异常，并引发蛋白质、脂肪、电解质和水盐的代谢紊乱，慢性高血糖是其诱发因素和主要特征。随着我国经济发展、人口老龄化和城镇化进程的加速，糖尿病等慢性非传染性代谢疾病的发病率将会明显增加，2010年中国慢性病及其危险因素监测报告显示，我国18岁及以上成人的糖尿病患病率达11.6％，2013年为10.7％，由此推测我国成年糖尿病患者人数为1.14亿，已成为世界上糖尿病患者人数最多的国家。其中2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，T2DM)为绝大多数，占糖尿病患者90％以上。

T2DM是胰岛素抵抗(IR)和胰岛β细胞功能缺陷共同导致的体内胰岛素作用不足，从而引发一系列代谢异常，是由多个基因遗传因素及环境因素综合引起的复杂病，因此，遗传因素在T2DM的产生和发展过程中起到至关重要的作用。

SLC30A8是新近发现的T2DM相关易感基因。该基因定位于人类第8号染色体的8q24.11，它编码与人类胰岛素分泌有关的锌转运载体蛋白8(ZNT-8)。该蛋白在β细胞囊泡膜上主要负责锌离子的聚集，为胰岛素的合成及储存提供锌离子，因此，其数量与活性的改变都将影响锌离子的聚集，从而在胰岛素的合成、储存及分泌过程中发挥举足轻重的作用。

近几年来，表观遗传学与疾病的发生发展的相关性已逐渐成为生物医学研究的焦点。与人类疾病相关的表观遗传学有DNA甲基化、mRNA的调控表达、基因印记以及组蛋白修饰等。DNA甲基化作为一种重要的表观遗传修饰方式，在T2DM患者体内DNA甲基化改变引起T2DM相关基因的表达异常，而相关基因的表达异常可能在疾病的发生及发展进程中起着非常重要的作用。同时，环境因素通过影响DNA甲基化修饰，也会增加T2DM的发病风险。

有研究显示，SLC30A8基因启动子区域甲基化可能导致基因mRNA表达下降，从而对T2DM的发生发展有着重要影响。而环境因素中，肥胖、吸烟、精神压力和睡眠低氧对该基因启动子区的甲基化有影响，这些因素可能通过调控该基因的甲基化影响T2DM的发病风险。

因此，针对SLC30A8基因启动子区域提供一种引物组合物，检测该基因启动子区域的甲基化状态，有助于辅助预测T2DM发病的危险性，从而能及早发现高危人群、并进行更早期的干预。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种引物组合物及其应用，通过选取SLC30A8基因启动子特定区域的6个CpG位点，亚硫酸氢盐处理基因组DNA，以处理后的产物为模板，对SLC30A8基因启动子特定区域进行扩增并采用焦磷酸测序检测该6个位点的甲基化比例，优化实验条件参数，各步骤各条件相互配合，准确定性检测位点变化情况和频率变化，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种引物组合物，所述引物组合物包括上游引物、下游引物和测序引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。