[发明专利]一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和外源性内参的特异性引物和探针；

所述甲型流感病毒的特异性引物序列如下：

IAV-F：5’-TTTGTGTTCACGCTCACCG-3’；SEQ ID NO.1；

IAV-R：5’-AGGGTCCCCATTCCCATTG-3’；SEQ ID NO.2；

所述甲型流感病毒的特异性探针序列如下：

IAV-P：5’-FAM-GCCCAGTGAGCGAGGACTGCAGC-BHQ-3’；SEQ ID NO.3；

所述乙型流感病毒的特异性引物序列如下：

IBV-F：5’-CATGGCAAAGAGCCCTTGACT-3’；SEQ ID NO.4；

IBV-R：5’-CAGGCTCACTTTTGTTGTGAG-3’；SEQ ID NO.5；

所述乙型流感病毒的特异性探针序列如下：

IBV-P：5’-HEX-ACCCTGGTCAAGACCGCCTAAAC-BHQ-3’；SEQ ID NO.6；

所述呼吸道合胞病毒的特异性引物序列如下：

RSV-F：5’-CCACTTTGGAAAGGACCAGCA-3’；SEQ ID NO.7；

RSV-R：5’-TCACCTGCCATCTGTTTTCCAT-3’；SEQ ID NO.8；

所述呼吸道合胞病毒的特异性探针序列如下：

RSV-P：5’-ROX-CATAAATTTACTGGGTTAATAGGTATG-BHQ-3’；SEQ ID NO.9；

所述外源性内参的特异性引物序列如下：

IR-F：5’-CCACTTTGGAAAGGACCAGCA-3’；SEQ ID NO.10；

IR-R：5’-TCACCTGCCATCTGTTTTCCAT-3’；SEQ ID NO.11；

所述外源性内参的特异性探针序列如下：

IR-P：5’-CY5-GCTAACTTCGGCAGTAAGTGTGAC-BHQ-3’；SEQ ID NO.12。

2.根据权利要求1所述的一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下成分：反应液、外源性内参、阴性对照和阳性对照。

3.根据权利要求2所述的一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述反应液含有pH8.3的Tris-HCl 20mM，KCl 100mM，明胶0.2mg/mL，dATP、dGTP、dCTP、dUTP各0.4mM，逆转录酶0.3U/μL，Taq DNA聚合酶0.2U/μL，UNG酶0.1U/μL，特异性引物和特异性探针的混合液。

4.根据权利要求3所述的一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述特异性引物和特异性探针的混合液含有：甲型流感病毒的特异性上游和下游引物各0.5μM，乙型流感病毒的特异性上游和下游引物各0.5μM，呼吸道合胞病毒的特异性上游和下游引物各0.5μM，外源性内参的特异性上游和下游引物各0.5μM，甲型流感病毒的特异性探针0.25μM，乙型流感病毒的特异性探针0.25μM，呼吸道合胞病毒的特异性探针0.25μM和外源性内参的特异性探针0.25μM。

5.根据权利要求2所述的一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述外源性内参为含有与该外源性内参基因序列相同的特定基因片段的慢病毒，所述外源性内参基因序列如下：

5’-CCACTTTGGAAAGGACCAGCAGCTAACTTCGGCAGTAAGTGTGACGGATGTGAATACAGATAAGTGAGTCTAGAAATAGTCCAGGCAAGGAACCAAATACATCGGATGCATATTTATGGAAAACAGATGGCAGGTGA-3’；SEQID NO.13。

6.根据权利要求2所述的一种呼吸道病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为无呼吸道病毒的健康人血清。