[发明专利]一种抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体，它是由杂交瘤细胞株RABV G Mab 7A3分泌的，所述杂交瘤细胞株RABV G Mab 7A3保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201975。本发明还公开了该单克隆抗体在制备狂犬病毒检测试剂盒中的应用以及一种狂犬病毒中和抗体竞争ELISA检测试剂盒，该试剂盒以狂犬病毒LBNSE毒株的全病毒蛋白为包被原，以量子点标记的单克隆抗体为竞争抗体，具有病毒传播风险小、检测灵敏度和准确性高，特异性好等优点。

技术领域

本发明涉及抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体及其在制备狂犬病毒检测试剂盒中的应用，属于病毒检测领域。

背景技术

狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患传染病，一旦发病，致死率接近100％。狂犬病毒是弹状病毒科、狂犬病毒属的单股负链RNA病毒，其由5个结构蛋白组成，包括核蛋白(N)、磷酸蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和RNA聚合酶(L)。狂犬病毒可感染几乎所有的温血动物，其主要通过带毒的犬猫抓伤或咬伤而传播，病毒进入人或动物体内后，首先在受伤部位的肌肉处短暂复制，随后进入附近的神经组织内逆轴突传播，沿外周神经系统逆行，最终到达中枢神经系统后大量复制，引发神经性脑炎，进而产生恐风、恐水、咽喉麻痹等神经症状，最终死亡。据最新报道，世界上每年多于6万人死于狂犬病。因此，狂犬病在暴露后的紧急预防接种和检测十分关键。

世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(OIE)建议只有人或动物的体内的狂犬中和抗体水平达到0.5IU/ml时，才能有效抵御狂犬病病毒的攻击。据不完全统计，每年约有1500万人被犬猫抓伤或咬伤，近年来，我国频发“假狂犬疫苗”事件，以及不同动物或人的免疫机能不一，每年仍然有超过500人死于狂犬病。因此，人和动物狂犬疫苗免疫结束后，应及时进行狂犬病毒中和抗体的检测，当抗体水平低于保护值时应该及时加强免疫。

目前，基于酶联免疫吸附试验(ELISA)建立的狂犬病毒中和抗体检测方法主要包括间接ELISA、竞争ELISA等，其主要原理都是通过抗原抗体反应，最后通过显色反应读数。目前全世界公认的狂犬病毒中和抗体检测金标准方法为快速荧光灶抑制试验(RFFIT)和荧光抗体病毒中和实验(FAVN)，二者均为细胞水平的病毒中和试验，检测结果的重复性、敏感性和特异性均较好。但是以上检测方法不仅对检测人员操作的熟练程度要求很高，而且还需要用到活的狂犬病毒，具有潜在的传播狂犬病毒的风险，仅在少量有资质的专业实验室才能够开展使用。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体。

本发明的第二个目的是提供抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体的应用，尤其是在制备狂犬病毒检测试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种狂犬病毒中和抗体竞争ELISA检测试剂盒。

本发明所提供的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株RABV G Mab 7A3所分泌的，所述杂交瘤细胞株RABV G Mab 7A3，于2019年04月29日保藏在湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:C201975。

所述杂交瘤细胞株RABV G Mab 7A3是以狂犬病毒LBNSE毒株的全病毒蛋白为抗原，免疫动物并进行细胞融合，然后进行抗性筛选获得的，该细胞株不仅能稳定分泌抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体，而且具有较高的中和活性，所产生的单克隆抗体能特异性识别不同狂犬病毒株抗原的构象表位。

因此，本发明提供的单克隆抗体能用于制备狂犬病毒检测试剂盒。

一种狂犬病毒中和抗体竞争ELISA检测试剂盒，含有包被在固相载体上的包被原和稀释的竞争抗体，所述包被原为狂犬病毒LBNSE毒株的全病毒蛋白，所述竞争抗体为以上所述的抗狂犬病毒G蛋白的单克隆抗体。

优选地，所述单克隆抗体是量子点标记的单克隆抗体。