[发明专利]一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法

说明书

本发明公开了一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，将大豆磷脂溶解于水或氯化钙溶液中，加入磷脂酶进行酶解反应；酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃‑低碳醇‑水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。本发明以普通大豆磷脂为原料，通过酶解反应，酶解后预处理及柱层析提纯工艺制备高纯度溶血磷脂酰胆碱，具有原材料廉价易得、工艺简单、可操作性强、产品收率高等特点，适合于工业化生产，生产的溶血磷脂酰胆碱纯度高、副产物少，产品质量稳定。

技术领域

本发明涉及磷脂代谢产物的制备方法，具体的说，是涉及一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法。

背景技术

溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine，简称LPC）是磷脂的代谢产物之一，亦称溶血卵磷脂，是磷脂酰胆碱脱去一条脂肪酸链后形成的产物。溶血磷脂酰胆碱的乳化能力，乳化稳定性等均优于普通磷脂产品；此外溶血磷脂酰胆碱还具有独特的生理活性，抑菌活性和抗氧化性能。因此溶血磷脂酰胆碱在食品工业，医药工业，化妆品工业及饲料工业中可以作为添加剂、医药中间体、药物载体及高效乳化剂使用。

例如，在医药领域中，高纯度溶血磷脂酰胆碱是靶向制剂的关键辅料之一，其也可以作为一类优良的抗癫痫药物的原料；因为溶血磷脂酰胆碱主要在肝脏代谢，在肝脏疾病和肝毒性中可发现明显含量变化，具体表现为溶血磷脂酰胆碱含量明显高于正常人，因此溶血磷脂酰胆碱也常被应用于肝脏病理研究用作标志物，另外溶血磷脂酰胆碱与糖尿病、动脉粥样硬化、血脂异常等代谢性疾病及心血管病密切相关，因此高纯度的溶血磷脂酰胆碱直接作为药物中间体，标志物或作为医药辅料使用的应用前景广阔。

制备溶血磷脂酰胆碱的方法主要有化学合成、酸碱水解、酶解、物理分离及柱层析等方法。这些方法各有优势，但又各有不足。例如化学合成法使用的原料毒性大，应用范围受到限制；酸碱水解法的水解反应程度难以控制；各种物理分离方法在目标产物的纯化上都遇到了难以克服的困难，且存在收率低、设备投资大、成本高等问题；酶解法容易出现各种副反应，难以直接实现高纯度溶血磷脂酰胆碱的制备；柱层析法严重依赖于初始原料的纯度，且过程中所选择的洗脱剂的种类、比例及用量等与最终分离效果有直接关系，不同的待分离物通常对应的是独特的固定相和洗脱剂及洗脱剂比例。

目前，制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的通行做法，是从高纯度的磷脂酰胆碱（PC）原料出发来获得目标产物。而这种做法存在着严重的原材料依赖性，所使用的原材料为高纯度磷脂酰胆碱（PC），该物质需要通过合成或复杂的提取手段获得，成本高昂，不容易得到。

在以普通大豆磷脂为起始原材料制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方向上，日本专利JP63091306A公开了一种以大豆磷脂为原料的制备方法，经过丙酮脱油，磷脂酶A2水解，硅胶柱层析，乙醇-水洗脱，最终得到溶血磷脂酰胆碱含量为87%，溶血磷脂酰乙醇胺含量为6%的产品；该专利技术所述的技术仍然存在所得产物纯度有限、难以彻底除掉其它结构相似组分（如溶血磷脂酰乙醇胺等）的问题。此外，专利CN104558021A公开了一种从大豆或蛋黄磷脂出发，直接采用多卤代烷烃-低碳醇-水混合洗脱剂直接进行柱层析，最终得到高纯度天然溶血磷脂酰胆碱的制备方法；但是，受限于起始原材料中溶血磷脂酰胆碱的极低含量（例如大豆磷脂中天然溶血磷脂酰胆碱的总含量通常约1%左右），该技术所描述的方法或存在着产品收率不高，提取效率有限，综合制备成本高的问题。

以上缺陷，值得解决。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法。

本发明技术方案如下所述：

一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，在磷脂酶存在下，对大豆磷脂进行酶解反应，酶解反应产物经过预处理后转移至硅胶柱中，并以多卤代低碳烷烃-低碳醇-水为洗脱剂进行多次洗脱，收集目标物的溶液，浓缩干燥后得到高纯度溶血磷脂酰胆碱产品。