[发明专利]树枝状介孔二氧化硅/二氧化铱复合纳米酶的制备和应用

权利要求书

1.利用树枝状介孔二氧化硅/二氧化铱复合纳米酶比色检测乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将已知不同活性的乙酰胆碱酯酶溶液分别与氯化硫代乙酰胆碱溶液在37℃下孵育，孵育后的混合溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液充分混合，并加入TMB溶液和H₂O₂溶液构成ATCh-TMB-H₂O₂检测体系，随后在45℃下保温5min；

S2、往ATCh-TMB-H₂O₂检测体系中加入树枝状介孔二氧化硅/二氧化铱复合纳米酶分散液，并在45℃下反应10min，随后取显色后的混合溶液在652nm处检测其吸光度；

S3、分别获得不同活性的乙酰胆碱酯酶溶液相对应的吸光度，以乙酰胆碱酯酶的酶活性为横坐标，吸光度的变化量为纵坐标，得到吸光度变化量-活性标准曲线；

S4、取待测乙酰胆碱酯酶，按照相同的方法检测其吸光度，与吸光度变化量-活性标准曲线对照计算得到其活性；

所述树枝状介孔二氧化硅/二氧化铱复合纳米酶的制备方法包括以下步骤：

将二氧化铱纳米颗粒分散液与表面修饰氨基的树枝状介孔二氧化硅按比例混合均匀，静置6-12h；

其中，所述二氧化铱纳米颗粒由激光液相烧蚀法制备而成，且粒径为1.2-1.6nm，所述树枝状介孔二氧化硅由软模板法制备而成，且所述树枝状介孔二氧化硅表面的氨基由氨丙基三乙氧基硅烷修饰而成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述ATCh-TMB-H₂O₂检测体系中，醋酸-醋酸钠缓冲溶液的pH为5.0，浓度为100mM，TMB的浓度为0.5mM，且H₂O₂的浓度为2mM。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述树枝状介孔二氧化硅/二氧化铱复合纳米酶分散液中二氧化铱的浓度为236.2μg/mL，加入量为10μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸光度变化量-活性标准曲线的线性范围为乙酰胆碱酯酶酶活性为0.25-8mU/mL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当S/N＝3时，所述乙酰胆碱酯酶活性检测的检出限为0.22mU/mL。