[发明专利]一种柔嫩艾美耳球虫超氧化物歧化酶及其应用

权利要求书

1.一种辅助鉴定待测柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性的分子标记的应用，所述应用可为如下1)-3)中的任一种：

1)辅助鉴定待测柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性；

2)辅助筛选具有或疑似具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性的柔嫩艾美耳球虫虫种；

3)辅助筛选不具有或疑似不具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性的柔嫩艾美耳球虫虫种；

所述分子标记为柔嫩艾美耳球虫超氧化物歧化酶基因(EtSOD)，所述EtSOD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述应用具体为利用特异引物对用于扩增柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性分子标记靶序列；

所述引物F为序列表的SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示的单链DNA分子；

所述引物R为序列表的SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7所示的单链DNA分子。

2.一种辅助鉴定待测柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性性的方法，包括如下步骤：

(1)以待测柔嫩艾美耳球虫的mRNA反转录产物为模板，采用权利要求1中的特异引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

(2)完成步骤(1)后，将PCR产物链接到原核表达载体，在原核表达系统中表达重组蛋白制备多克隆抗体或单克隆抗体；采用制备的抗体对柔嫩艾美耳球虫蛋白进行western-blot检测；

(3)完成步骤(2)后，进行如下判断：如果所述Western-blot检测中EtSOD蛋白在待测柔嫩艾美耳球虫田间分离株高于敏感株判定待测柔嫩艾美耳球虫具有或疑似具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性，如果所述Western-blot检测中EtSOD蛋白在待测柔嫩艾美耳球虫田间分离株低于或相当于敏感株，待测柔嫩艾美耳球虫不具有或疑似不具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性。

3.一种辅助鉴定待测柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性的方法，包括如下步骤：

(1)以待测柔嫩艾美耳球虫的cDNA第一链为模板

(2)采用权利要求1中的特异引物对进行定量PCR；

(3)完成步骤(2)后，进行如下判断：如果所述定量PCR扩增产物中mRNA的转录含量在待测柔嫩艾美耳球虫田间分离株高于敏感株判定待测柔嫩艾美耳球虫具有或疑似具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性，如果所述定量PCR扩增产物中mRNA的转录含量在待测柔嫩艾美耳球虫田间分离株低于或相当于敏感株，待测柔嫩艾美耳球虫不具有或疑似不具有地克珠利耐药性和马杜拉霉素耐药性。