[发明专利]一株嘧霉胺单克隆抗体杂交瘤细胞株HFG及其应用

权利要求书

1.一株嘧霉胺单克隆抗体杂交瘤细胞株HFG，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年3月7日，保藏编号CGMCC No. 17389。

2.嘧霉胺单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.17389的嘧霉胺单克隆抗体杂交瘤细胞株HFG分泌产生。

3.权利要求2所述嘧霉胺单克隆抗体的应用，其特征在于：用于食品安全检测中嘧霉胺残留的分析检测。

4.嘧霉胺单克隆抗体杂交瘤细胞株HFG所采用的抗原的制备方法，其特征是步骤如下：

（1）半抗原的制备：将2-氯-4,6-二甲基嘧啶5mmol，4-氨基苯甲酸5mmol的二恶烷20mL溶液在75℃下搅拌30h；冷却至室温后，将其减压干燥，用甲酸0.5mL溶解残余物，缓慢加入水使其沉淀，用冷水反复洗涤沉淀物并真空干燥；最后，进行HPLC，得到粉红色粉末状的嘧霉胺衍生物，即嘧霉胺半抗原；

（2）完全抗原嘧霉胺-BSA的制备：称取1mg嘧霉胺半抗原，2.3mg N-羟基琥珀酰亚胺NHS，溶解于300μL N,N-二甲基甲酰胺DMF中，室温搅拌反应10min；再称取1.45mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，用100μL DMF充分溶解后，加入到嘧霉胺半抗原溶液中，室温搅拌反应6-8 h，作为A液；取10mg BSA，使嘧霉胺半抗原与牛血清白蛋白BSA摩尔比为60：1，用2mL 0.01M pH=8.6硼酸盐缓冲溶液BB溶解，作为B液；再逐滴将A液缓慢加入到B液中，室温反应过夜；然后用0.01M PBS溶液透析，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原嘧霉胺-BSA，并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。